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《In-fusion技術(shù)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、In-Fusion克隆技術(shù)介紹15July2021寶日醫(yī)生物技術(shù)（北京）有限公司基因克隆背景簡(jiǎn)介15July20212TA克隆限制性酶切克隆平滑末端克隆缺點(diǎn)：連接效率低耗時(shí)較長(zhǎng)需要特定限制性酶切位點(diǎn)In-Fusion克隆產(chǎn)品15July20213Clontech專利In-Fusion?HDCloningSystem任意載體任意基因片段這是一款讓您隨心所欲地實(shí)現(xiàn)基因定向克隆的產(chǎn)品！In-Fusion?基因克隆特點(diǎn)4主要內(nèi)容15July202152In-Fusion?優(yōu)點(diǎn)及應(yīng)用實(shí)例3In-Fusion?系列
2、產(chǎn)品介紹4常見問答1In-Fusion?克隆技術(shù)的原理15July20216主要內(nèi)容2In-Fusion?優(yōu)點(diǎn)及應(yīng)用實(shí)例3In-Fusion?系列產(chǎn)品介紹4常見問答1In-Fusion?克隆技術(shù)的原理In-Fusion?基因克隆技術(shù)原理示意圖In-Fusion專利酶Clontech專利In-Fusion是一種快速、簡(jiǎn)單、高效的基因克隆技術(shù)！50℃，15min單管反應(yīng)715July20218主要內(nèi)容2In-Fusion?優(yōu)點(diǎn)及應(yīng)用實(shí)例3In-Fusion?系列產(chǎn)品介紹4常見問答1In-Fusion?克隆技
3、術(shù)的原理In-Fusion?克隆技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)15July20219不附加任何多余序列2不受限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)的限制3可同時(shí)克隆兩個(gè)或多個(gè)DNA片段41簡(jiǎn)便、快速、高效的克隆技術(shù)簡(jiǎn)便、快速、高效的克隆技術(shù)15July202110快速！15July202111In-FusionHD無(wú)論是克隆長(zhǎng)基因片段還是克隆多個(gè)基因片段都能保持較高的克隆效率。高效！簡(jiǎn)便、快速、高效的克隆技術(shù)不附加任何多余序列15July202112線性化載體任意載體克隆位點(diǎn)目的DNA片段不需要的堿基序列引物設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增與載體相同的15個(gè)
4、堿基序列In-Fusion連接反應(yīng)15min不附加任何多余序列的重組載體無(wú)縫克?。翰桓郊尤魏味嘤嘈蛄蠥BC不受限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)的限制15July202113In-Fusion克隆不受限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)的限制:在cDNA序列中插入內(nèi)含子,熒光蛋白基因在cDNA序列添加UTRs轉(zhuǎn)換純化標(biāo)簽例如Myc轉(zhuǎn)換為His缺失蛋白表達(dá)區(qū)域…表達(dá)載體選擇插入位點(diǎn)PCR擴(kuò)增純化目的DNA片段混合In-FusionIn-Fusion引物設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增重組載體可同時(shí)克隆兩個(gè)或多個(gè)DNA片段15July202114Step
5、2:目的DNA片段擴(kuò)增Step3:一次In-Fusion連接反應(yīng)Step1:制備線性化載體片段1片段2片段3線性化載體重組載體克服傳統(tǒng)克隆技術(shù)的限制15July202115克服其它克隆技術(shù)的限制其它克隆技術(shù)的限制In-Fusion解決方案載體的限制不同克隆試劑盒都需要與之匹配的載體必須使用提供的載體只要載體末端和插入片段末端具有15個(gè)同源堿基，In-Fusion就可以將任意PCR片段插入任意線性化載體中。必須進(jìn)行限制性內(nèi)切酶酶切和連接需要獨(dú)一無(wú)二、兼容的酶切位點(diǎn)極少的合適酶切位點(diǎn)In-Fusion不受限
6、制性酶切位點(diǎn)的限制，因此在目的片段及使用的載體中是否存在合適的酶切位點(diǎn)并不妨礙克隆。亞克隆繁瑣多片段不能同時(shí)克隆In-Fusion能夠在一次反應(yīng)中同時(shí)克隆多個(gè)片段，無(wú)需進(jìn)行亞克隆。對(duì)于大片段克隆效率較低對(duì)于插入片段有限制In-Fusion系統(tǒng)能夠高效克隆0.05-15kbDNA片段。非定向克隆需要篩選目的片段插入方向正確的克隆In-Fusion是基因定向克隆技術(shù)，因此無(wú)需進(jìn)行目的基因片段正確插入的克隆的篩選。會(huì)附加多余堿基序列In-Fusion是無(wú)縫克?。翰桓郊尤魏味嘤鄩A基序列。不適合中型和大規(guī)?？寺」?/p>
7、程In-Fusion技術(shù)已經(jīng)成功用于多項(xiàng)高通量克隆工程。In-Fusion?克隆技術(shù)的應(yīng)用15July202116應(yīng)用多片段克隆構(gòu)建載體模型插入突變位點(diǎn)高通量克隆15July202117應(yīng)用實(shí)例實(shí)例：多個(gè)DNA片段（1kb,2kb,3kb)同時(shí)克隆【方法】使用TaKaRa高品質(zhì)PCR酶分別擴(kuò)增1kb、2kb、3kb的目的DNA片段和2.7kb的載體，并將擴(kuò)增產(chǎn)物混合，使用In-Fusion?HD試劑盒完成克隆。利用高效率的感受態(tài)細(xì)胞StellarTMCompetentCells（產(chǎn)品編號(hào)：636763）
8、轉(zhuǎn)化并進(jìn)行藍(lán)/白斑篩選。引物設(shè)計(jì)及目的基因片段擴(kuò)增15July202118引物的5’末端必須包含與載體末端相同的15個(gè)堿基序列引物的3’末端必須包含與目的基因片段相互補(bǔ)的特異堿基序列載體線性化15July202119PCR擴(kuò)增酶切處理In-Fusion連接反應(yīng)15July202120In-Fusion專利酶線性化載體目的基因片段反應(yīng)液直接轉(zhuǎn)化In-Fusion連接反應(yīng)50℃15min【結(jié)果】CloningEnhancer處理，37℃15mi
