實(shí)驗(yàn)六 環(huán)境因素對(duì)微生物的影響和紫外誘變效應(yīng)

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1、環(huán)境因素對(duì)微生物的影響和紫外誘變效應(yīng)生05邊曄2010030026周四班同組成員：徐競(jìng)實(shí)驗(yàn)時(shí)間2012年11月22日一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解物理因素、化學(xué)因素及生物因素抑制或殺死微生物的作用及其試驗(yàn)方法。2.了解紫外線誘變?cè)恚⒊醪秸莆兆贤饩€誘變育種的方法。3.練習(xí)單菌落劃線分離微生物。二、實(shí)驗(yàn)原理在自然界中，微生物分布極其廣泛，幾乎無(wú)處不在，微生物的生長(zhǎng)發(fā)育受著環(huán)境因素的影響。而不同的微生物及微生物不同的生理狀態(tài)受環(huán)境因素影響的程度也不同，有的環(huán)境因素是微生物生長(zhǎng)繁殖所必需的條件，有的表現(xiàn)為抑制作用，有的表現(xiàn)為殺菌作用。溫度通過(guò)影響蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的結(jié)構(gòu)與功能以及

2、細(xì)胞結(jié)構(gòu)來(lái)影響微生物的生長(zhǎng)、繁殖和新陳代謝。微生物群體生長(zhǎng)、繁殖最快的溫度為其最適生長(zhǎng)溫度，但它并不等于積累某一代謝產(chǎn)物的最適溫度。粘質(zhì)沙雷氏菌能產(chǎn)生紅色或紫紅色色素，菌落表面顏色隨著色素量的增加呈現(xiàn)出由橙黃到深紅色逐漸加深的變化趨勢(shì)。常用的化學(xué)消毒劑主要包括重金屬及其鹽類、有機(jī)溶劑(酚、醇、醛等)、鹵族元素及其化合物和表面活性劑等。根據(jù)是殺死還是抑制微生物，可分為致死劑和抑制劑。常用的3個(gè)指標(biāo)：最低抑制濃度（MIC）、半致死劑量和最低致死劑量。許多微生物在其生命活動(dòng)過(guò)程中能產(chǎn)生某種特殊代謝產(chǎn)物如抗生素，具有選擇性地抑制或殺死其他微生物的作用。不同抗生素的抗菌譜是不同的，

3、某些抗生素只對(duì)少數(shù)細(xì)菌有抗菌作用。產(chǎn)黃青霉分泌青霉素抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成。青霉素主要抗G＋細(xì)菌。鏈霉素作用于核糖核酸30S亞基，所以鏈霉素只作用原核生物。鏈霉素以抗G－細(xì)菌為主。紫外線具有殺菌作用主要是因?yàn)樗T導(dǎo)形成胸腺嘧啶二聚體來(lái)破壞DNA的結(jié)構(gòu)，使其不能正常行使功能。另外，空氣在紫外線照射下產(chǎn)生臭氧(O3)，也有一定殺菌作用。紫外線殺菌力最強(qiáng)的波長(zhǎng)是226-256nm部分。紫外線透過(guò)物質(zhì)能力很差，所以只適用于空氣及物體表面的滅菌，它距離照射物以不超過(guò)1.2米為宜。紫外線對(duì)于人體也有傷害作用。紫外線對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的影響是隨著紫外線對(duì)微生物照射劑量、時(shí)間及距離的不同，對(duì)微生物

4、的生理活動(dòng)也相應(yīng)地產(chǎn)生不同的效果：劑量高、時(shí)間長(zhǎng)、距離短就易殺死它們，劑量低、時(shí)間短、距離長(zhǎng)時(shí)就會(huì)有少量個(gè)體殘存下來(lái)，其中一些個(gè)體的遺傳特性發(fā)生了變異。我們可以利用這種特性來(lái)進(jìn)行滅菌或菌種選育工作。紫外誘變最有效的波長(zhǎng)僅僅是在253～265nm，一般紫外線殺菌燈所發(fā)射的紫外線大約有80%是254nm。三、實(shí)驗(yàn)儀器、材料和用具紫外照射箱，37℃、33℃、30℃、25℃培養(yǎng)箱25個(gè)淀粉培養(yǎng)基平板在一邊已長(zhǎng)成一直線狀菌落的產(chǎn)黃青霉，涇陽(yáng)鏈霉菌平板各1個(gè)培養(yǎng)18小時(shí)的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草桿菌菌液，粘質(zhì)賽氏桿菌的平板無(wú)菌的小圓濾紙片、接種環(huán)、涂布棒、黑紙、標(biāo)簽紙、酒精燈、

5、記號(hào)筆、打火機(jī)、試管架、各種規(guī)格的移液器及槍頭1%稀釋的84消毒液，0.05%甲紫，95%乙醇，75%乙醇，1%過(guò)氧化氫，2.5%的碘液，5%苯酚，1%甲醛，一、實(shí)驗(yàn)步驟1.溫度對(duì)微生物（粘質(zhì)賽氏桿菌和未知菌）的影響實(shí)驗(yàn)用接種環(huán)取培養(yǎng)好的粘質(zhì)賽氏桿菌單菌落，在3個(gè)淀粉平板上分區(qū)劃線接種，要保證能得到單一菌落。做好標(biāo)記，將第一個(gè)平板在25℃，第二個(gè)在30℃進(jìn)行培養(yǎng)，第三個(gè)在37℃進(jìn)行培養(yǎng)。24h后取出，觀察不同溫度下培養(yǎng)粘質(zhì)賽氏桿菌生長(zhǎng)狀況和產(chǎn)生色素情況。用接種環(huán)取培養(yǎng)好的未知菌的單菌落，在3個(gè)淀粉平板上分區(qū)劃線接種，要保證能得到單一菌落。做好標(biāo)記，將第一個(gè)平板在30℃，第

6、二個(gè)在33℃進(jìn)行培養(yǎng)，第三個(gè)在37℃進(jìn)行培養(yǎng)。24h后取出，觀察不同溫度下菌落生長(zhǎng)情況判斷最適生長(zhǎng)溫度。2.化學(xué)因素對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響用無(wú)菌吸頭吸取100μl金黃色葡萄球菌菌液于淀粉培養(yǎng)基上，用無(wú)菌涂布棒涂布均勻。將上述培養(yǎng)皿用記號(hào)筆分成8等份，每一等份內(nèi)標(biāo)明一種藥物名稱。用無(wú)菌鑷子將小濾紙片分別浸入各種藥劑中，然后對(duì)號(hào)放入培養(yǎng)皿的小區(qū)內(nèi)。注意不要造成藥品交叉污染。置37℃溫室培養(yǎng)24h后，觀察。比較抑菌圈大小。3.生物因素對(duì)微生物生長(zhǎng)影響取已接種產(chǎn)黃青霉和涇陽(yáng)鏈球菌并培養(yǎng)48小時(shí)的平板各一，在菌苔邊緣5毫米處垂直向外劃直線接種大腸桿菌，枯草桿菌，金黃色葡萄球菌。37℃培

7、養(yǎng)24小時(shí)，觀察結(jié)果。4.紫外線的對(duì)微生物的影響（紫外線的殺菌效果檢驗(yàn)）用無(wú)菌吸頭吸取100μ1培養(yǎng)18h的金黃色葡萄球菌液于淀粉培養(yǎng)基平板上，以無(wú)菌涂棒涂布均勻；用一張紙片遮住部分平板培養(yǎng)基，打開(kāi)皿蓋，置紫外燈下照射3min后取出紙，蓋上皿蓋。在黑暗中（或紅燈下）用雙層報(bào)紙包裹，倒置于37℃培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。5.紫外線對(duì)微生物的誘變效應(yīng)取搖瓶培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的枯草桿菌菌液0.1ml加入0.9ml生理鹽水中，進(jìn)行10倍稀釋，依次做10-1～10-8稀釋。各取100μl菌液涂平板，每稀釋度涂2個(gè)。紫外線照射：10-5照射20