《生化制藥》PPT課件

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1、1調(diào)整期：細菌代謝活躍，大量合成細胞分裂所需的酶類、ATP以及其他細胞成分2對數(shù)期：細菌代謝旺盛，個體的形態(tài)和生理特性比較穩(wěn)定（調(diào)整期和對數(shù)期的細菌幾乎不存在種內(nèi)斗爭）3穩(wěn)定期：有害代謝產(chǎn)物積累，新增細胞數(shù)目與死亡細胞數(shù)目達到動態(tài)平衡，次級代謝產(chǎn)物大量積累，形成芽孢（穩(wěn)定期的細菌種內(nèi)斗爭最激烈）4衰亡期：細菌數(shù)目急劇下降，出現(xiàn)畸形細菌（衰亡期的細菌和無機環(huán)境的斗爭最激烈）基因組文庫的構(gòu)建步驟1、從組織或細胞提取基因組DNA；2、用限制性酶部分水解成適當長度的DNA片段，經(jīng)分級分離選出一定大小合適克隆的DNA片

2、段；3、通常采用λ噬菌體或柯斯質(zhì)粒載體等容載量較大的克隆載體，在適當位點將載體切開；4、將基因組DNA片段與載體進行體外連接；5、重組體DNA直接轉(zhuǎn)化細菌或用體外包裝的重組λ噬菌體顆粒感染敏感細菌細胞。最后得到攜帶重組DNA的細菌群體或噬菌體群體即構(gòu)成基因文庫。cDNA文庫的構(gòu)建步驟①從生物體或細胞中提取mRNA；②利用逆轉(zhuǎn)錄酶以寡聚核苷酸為引物合成cDNA的一條鏈；③利用DNA聚合酶I，以cDNA第一條鏈作為模板，用適當引物合成cDNA第二條鏈；④cDNA與載體的體外連接；⑤噬菌體的體外包裝及感染或質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化

3、。動物細胞培養(yǎng)基種類和組成動物血清的作用提供有利于細胞生長增殖所需的各種生長因子和激素；提供有利于細胞貼壁所需的貼壁因子和生長因子；提供可識別金屬、激素、維生素和脂質(zhì)的結(jié)合蛋白；提供細胞生長所必需的脂肪酸和微量元素；提供良好的pH緩沖系統(tǒng)。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖與氧反應生成葡萄糖酸和H2O2，生成的H2O2在過氧化物酶的作用下分解為水和原子氧，新生態(tài)的原子氧將無色的還原型鄰聯(lián)苯甲胺氧化成藍色物質(zhì)。顏色的深淺與樣品中葡萄糖濃度成正比。隨著樣品中葡萄糖濃度的增加，酶試紙的顏色由粉紅一紫紅一紫色一藍色，不斷加深。其反

4、應過程如下：此酶試紙已在臨床中用以測定血液或尿液中的葡萄糖含量，以診斷糖尿病。酶偶聯(lián)法檢測葡萄糖原理葡萄糖+O2葡萄糖酸+H2O2H2O2H2O+[O][O]+還原型鄰聯(lián)苯胺氧化型鄰聯(lián)苯胺（無色）（藍色）葡萄糖氧化酶利用微生物技術(shù)，通過高度工程化的新型綜合技術(shù)，以利用微生物反應過程為基礎，依賴于微生物機體在反應器內(nèi)的生長繁殖及代謝過程來合成一定產(chǎn)物，通過分離純化進行提取精制，并最終制劑成型來實現(xiàn)藥物產(chǎn)品的生產(chǎn)。發(fā)酵工程制藥的定義1、微生物菌體的發(fā)酵SCP、藥用真菌（冬蟲夏草、茯苓等）生物防治制劑（如蘇云金桿菌）

5、活性乳制劑細胞的生長與產(chǎn)物的積累成平行關(guān)系，生長速率最大的時期也是產(chǎn)物合成最高階段。微生物發(fā)酵類型2、微生物酶發(fā)酵各種酶制劑：糖化酶、α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等天冬酰胺酶：抗癌納豆激酶、鏈激酶：治療血栓青霉素?；福呵嗝顾厣a(chǎn)需要誘導或遭受阻遏、抑制等調(diào)控作用，在菌種選育、培養(yǎng)基配制以及發(fā)酵條件等方面需注意。3、微生物代謝產(chǎn)物發(fā)酵初級代謝產(chǎn)物：與菌體生長相伴隨的產(chǎn)物、對菌體生長、分化和繁殖是必須的氨基酸、核苷酸、維生素、糖類等菌體對其合成反饋控制嚴密，一般不過量積累次級代謝產(chǎn)物：與菌體生長不相伴隨，以初級代謝

6、的中間產(chǎn)物為原料而合成抗生素、生物堿、毒素、色素、胞外多糖等結(jié)構(gòu)較復雜，對環(huán)境條件敏感4、微生物轉(zhuǎn)化發(fā)酵利用微生物細胞的一種或幾種酶，對外源化合物的特定部位進行加工，如加入羥基、還原雙鍵、脫氧或切斷支鏈等。反應最顯著的特點是特異性強，包括反應特異性、結(jié)構(gòu)位置特異性、立體特異性。如：甾體轉(zhuǎn)化可的松（Cortisone）藥用發(fā)酵產(chǎn)品分類生物來源作用對象作用機制化學結(jié)構(gòu)細菌真菌放線菌抗菌藥抗腫瘤藥抗病毒藥除草劑酶抑制劑免疫調(diào)節(jié)劑抑制細胞壁合成藥影響細胞膜功能藥干擾蛋白質(zhì)合成藥抑制核酸合成藥抑制生物能量反應藥抗生素維生

7、素氨基酸核苷酸甾體激素酶及酶抑制劑發(fā)展趨勢利用DNA重組技術(shù)和細胞工程技術(shù)的發(fā)展、新的工程菌和新型微生物的開發(fā)；新型的生理活性多肽和蛋白質(zhì)類藥物：干擾素、白介素、促紅細胞生成素等；新型菌體制劑和疫苗。紅細胞生成素(治療貧血)生長激素(促進生長)胰島素(治療糖尿病)干擾素(抗病毒、抗腫瘤)發(fā)酵菌種的選育要求生產(chǎn)力：能在廉價的培養(yǎng)基上迅速生長，所需的代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量高，其它類似代謝產(chǎn)物少。操作性：培養(yǎng)條件簡單，發(fā)酵易控制，產(chǎn)品易分離。穩(wěn)定性：抗噬菌體能力強，菌種純粹，遺傳性狀穩(wěn)定、不易變異退化。安全性：非病源菌，不產(chǎn)

8、有害生物活性物質(zhì)或毒素。從自然界中獲得新菌種土壤、空氣、動植物等，嚴重污染的水域，極端環(huán)境等基本程序：采樣→預處理→富集培養(yǎng)→篩選→鑒定→野生型菌株誘變育種物理或化學方法誘發(fā)突變。物理誘變劑：紫外線、X-射線、γ-射線等化學誘變劑：氮芥、亞硝酸、5-氟尿嘧啶等雜交育種：借助有性重組，使不同菌株的遺傳物質(zhì)得以交換。原生質(zhì)體融合育種：借助原生質(zhì)融合技術(shù)實現(xiàn)遺傳物質(zhì)的交換?；蚬こ逃N：DN