《疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)》PPT課件

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1、第三章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)韶關(guān)學(xué)院生科院易道生內(nèi)容掌握抗原抗體反應(yīng)的原理與特點(diǎn)，了解抗原抗體結(jié)合力和比例。掌握免疫組化（IHC）的原理和方法，熟悉一抗、二抗的選擇與使用。掌握酶聯(lián)免疫檢測(cè)（ELISA）反應(yīng)的原理方法。掌握免疫印痕（Westernblot）的技術(shù)原理與方法。了界放射免疫檢測(cè)技術(shù)（RIA）的原理與方法。目標(biāo)：掌握ELISA、IHC、Westernblot的操作方法免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)就是利用抗原和抗體高度特異性結(jié)合的原理和方法，檢測(cè)分析各樣品中的目標(biāo)物質(zhì)，以監(jiān)控物品質(zhì)量、檢測(cè)機(jī)體免疫機(jī)能和診斷某些疾病的體外檢測(cè)方法。免疫檢測(cè)

2、是微量檢測(cè)方法，靈敏、特異。隨著方法和技術(shù)的改進(jìn)，免疫檢測(cè)方法已滲入工、農(nóng)、食品、醫(yī)藥等各個(gè)領(lǐng)域。從20世紀(jì)50年代美國(guó)學(xué)者Berson和Yallow發(fā)明了放射免疫測(cè)定技術(shù)檢測(cè)胰島素起，免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)經(jīng)歷了從定性到定量；從常量分析到微量、超微量分析；從手工檢測(cè)到全自動(dòng)化；從單個(gè)標(biāo)本檢測(cè)到高通量檢測(cè)等一系列長(zhǎng)足的進(jìn)步。本章主要學(xué)習(xí)血清學(xué)檢測(cè)方法——抗原抗體檢測(cè)方法。年代學(xué)者貢獻(xiàn)1894J.Bordet補(bǔ)體與溶菌活性1896H.Durham,M.vonGruber特異凝集反應(yīng)1896G.Widal,A.Sicad肥達(dá)試驗(yàn)1897

3、R.Kraus沉淀試驗(yàn)1900J.Bordet,O.Gengou補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)1900K.Landsteiner人類(lèi)ABO血型及其抗體1906A.Wassermann梅毒補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)1935M.Heidelberger,F.Kendall純化抗體,定量沉淀反應(yīng)1941A.Coons免疫熒光標(biāo)記1946J.Oudin凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng)1948O.Ouchterlony,S.Elek雙擴(kuò)散沉淀反應(yīng)1953P.Grabar,C.Williams免疫電泳分析,Ig多樣性1960R.Yallow,S.Berson放射免疫標(biāo)記1966S.Av

4、rames,J.Uriel,etal酶標(biāo)免疫技術(shù)1975G.Kohler,C.Milstein雜交瘤技術(shù)與單克隆抗體免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展史第一節(jié)免疫學(xué)檢測(cè)的基本原理抗原抗體反應(yīng)指抗原與相應(yīng)抗體間的特異性結(jié)合反應(yīng)。曾叫血清學(xué)反應(yīng)?？贵w結(jié)構(gòu)CCFcFabNNNNCC一、抗原抗體的特異性結(jié)合抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)，在體內(nèi)可介導(dǎo)溶細(xì)胞效應(yīng)、溶菌、中和病毒、促吞噬作用，形成一整套機(jī)體體液免疫功能。體外反應(yīng)有凝集作用、沉淀作用、調(diào)節(jié)作用、中和作用等。1、抗原抗體的互補(bǔ)性和親和性抗原抗體的結(jié)合是基于抗原決定簇（表位）與抗體超變區(qū)分子間的互補(bǔ)性和親

5、和性?；パa(bǔ)性指抗原表位的空間結(jié)構(gòu)與抗體分子超變區(qū)內(nèi)的抗原結(jié)合位點(diǎn)間的空間結(jié)構(gòu)互補(bǔ)嵌合。親和性指抗體分子上的抗原結(jié)合位點(diǎn)與相應(yīng)抗原表位間互相適應(yīng)產(chǎn)生的吸引力。互補(bǔ)性是Ag和Ab結(jié)合的基礎(chǔ)，親和性是Ag和Ab間固有的作用力。2、抗原抗體結(jié)合力抗原和抗體分子的結(jié)合可以是游離形式的，也可以結(jié)合在細(xì)胞表面。這種結(jié)合也是非共價(jià)鍵結(jié)合。抗原與抗體相互結(jié)合只局限于分子表面的特定部位，即抗原決定簇和抗體結(jié)合位點(diǎn)之間，且以親和力的作用方式結(jié)合在一起。由這些特定部位之間的短程分子力相互作用的結(jié)果。這些吸引力只有在極短的距離內(nèi)才有效。因此抗原決定簇

6、與抗體結(jié)合位點(diǎn)在空間上必須處于緊密接觸狀態(tài)，才能產(chǎn)生足夠的結(jié)合力。這種分子間的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)決定了抗原抗體結(jié)合的專一性?？乖贵w間的作用力有：抗原抗體分子間的作用力，即親和力包括以下幾種：1、鹽鍵（離子鍵）2、范德華力3、疏水作用4、氫鍵3、親水膠轉(zhuǎn)化為疏水膠抗體和大部分抗原在溶液中是親水膠，不會(huì)聚沉。一旦破壞電荷和水化層，如Ag+Ab，減少電荷，由親水膠轉(zhuǎn)化為疏水膠，形成可見(jiàn)的Ag–Ab復(fù)合物沉淀。利用此沉淀反應(yīng)可檢測(cè)相應(yīng)的抗原或抗體。二、抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)1、特異性抗原與抗體相互結(jié)合必須有空間構(gòu)型的互補(bǔ)性，因此，有很強(qiáng)的特異性

7、。但，如果兩種抗原存在相同（似）的表位，或抗原、抗體間構(gòu)型有部分或全部相同，就可能出現(xiàn)交叉結(jié)合——凝集或沉淀。既可能干擾實(shí)驗(yàn)，也可以用于擴(kuò)大應(yīng)用范圍。2、比例性抗原（多價(jià)）抗體（2價(jià)或以上）不等價(jià)性，使抗原抗體反應(yīng)時(shí)存在比例關(guān)系，生成物的量與反應(yīng)物的量（濃度）有關(guān)。比例性：抗原抗體結(jié)合生成復(fù)合物的量與反應(yīng)物濃度的關(guān)系。只有2者分子比例合適，結(jié)合價(jià)相互飽和，才生成可見(jiàn)的復(fù)合物。在等價(jià)帶區(qū)的溶液中幾乎不存在游歷的抗原和抗體。滴度（效價(jià)）指抗原或抗體與一定量的對(duì)應(yīng)物產(chǎn)生明顯可見(jiàn)的反應(yīng)所需的最小量?？乖贵w反應(yīng)的等價(jià)帶（zoneof

8、equivalence）：曲線的高峰部分，抗原抗體分子比例合適的范圍。在此范圍內(nèi)，抗原抗體充分結(jié)合，沉淀物形成快而多。最適比（optimalratio）：其中有一管反應(yīng)最快，沉淀物形成最多，上清液中幾乎無(wú)游離抗原或抗體存在，表明抗原與抗體濃度的比例最為合適。帶現(xiàn)象（zonephenomen