《疫學(xué)檢測》ppt課件

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1、第十九章免疫學(xué)檢測第一節(jié)抗原抗體的測定一、抗原抗體反應(yīng)的相關(guān)理論抗原具有抗原性（免疫反應(yīng)性），可與相應(yīng)的抗體在體外發(fā)生特異性結(jié)合，并在一定條件下出現(xiàn)可見反應(yīng)現(xiàn)象。故可用已知的抗原（或抗體）檢測未知的抗體（或抗原）。因抗體主要存在與血清中，故又稱為血清學(xué)反應(yīng)。（一）抗原抗體反應(yīng)的特點1.特異性2.可逆性3.比例性和結(jié)合物的可見性4.階段性（1）特異性結(jié)合階段（2）可見反應(yīng)階段（二）抗原抗體反應(yīng)的主要影響因素1.抗原、抗體反應(yīng)的濃度、比例2.電解質(zhì)3.溫度4.酸堿度三、血清學(xué)反應(yīng)的種類（一）凝集反應(yīng)（agglutination）1.直接凝集反應(yīng)（directagglu

2、tination）是指顆粒性抗原（凝集原）與相應(yīng)的抗體（凝集素）直接結(jié)合所呈現(xiàn)的凝集現(xiàn)象。如紅細(xì)胞ABO血型的測定，細(xì)菌凝集試驗。2.間接凝集反應(yīng)（indirectpassiveagglutination）是可溶性抗原或抗體吸附于與免疫無關(guān)的微球載體上，形成致敏顆粒，與相應(yīng)的抗體或抗原在電解質(zhì)存在的條件下進(jìn)行反應(yīng)，出現(xiàn)凝集。（二）沉淀反應(yīng)（precipetation）是指可溶性抗原與相應(yīng)抗體在合適的電解質(zhì)存在下，出現(xiàn)肉眼可見的沉淀現(xiàn)象。1.單向瓊脂擴散試驗2.火箭電泳3.雙向瓊脂擴散試驗4.對流免疫電泳（三）補體結(jié)合試驗（complementfixationtes

3、t，CFT)是在補體參與下，以綿羊紅細(xì)胞和溶血素作為指示系統(tǒng)，來檢測未知抗原或抗體的試驗。（四）中和反應(yīng)（nertralization）毒素、酶、激素或病毒等與其相應(yīng)的抗體結(jié)合后，導(dǎo)致生物活性的喪失。1.病毒中和反應(yīng)2.毒素中和反應(yīng)（五）免疫標(biāo)記技術(shù)1.免疫酶技術(shù)2.免疫熒光技術(shù)3.放射免疫測定4.免疫膠體金標(biāo)記技術(shù)第二節(jié)免疫細(xì)胞的檢測一、免疫細(xì)胞的分離（一）外周血單個核細(xì)胞的分離（二）T、B及其它免疫細(xì)胞的純化（三）免疫磁珠分離法（四）熒光激活細(xì)胞分離儀分離法二、免疫細(xì)胞的計數(shù)（一）花環(huán)形成試驗（二）熒光抗體染色三、免疫細(xì)胞功能的檢測（一）T細(xì)胞功能的測定淋巴細(xì)

4、胞轉(zhuǎn)化試驗:T細(xì)胞在體外受特異性抗原或有絲分裂原（PHA、ConA等）刺激后，能轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞。試驗時取外周血，分離淋巴細(xì)胞，加入有絲分裂原或特異性抗原，在培養(yǎng)液中培養(yǎng)72小時，經(jīng)涂片染色后鏡檢計算轉(zhuǎn)化百分率。（二）B細(xì)胞功能的檢測1.空斑形成細(xì)胞檢測（plaqueformingcell，PFC）是動物體外檢測B細(xì)胞功能的方法。2.定量溶血分光光度法（QHS）又稱B細(xì)胞介導(dǎo)的紅細(xì)胞定量溶血分光光度法，反映機體的體液免疫功能。3.酶聯(lián)免疫斑點試驗（三）其他淋巴細(xì)胞功能的檢測1.NK細(xì)胞活性測定（1）NK細(xì)胞自然殺傷功能的檢測（2）ADCC試驗2.LAK細(xì)胞活性測定

5、（四）吞噬細(xì)胞功能檢測1.中性粒細(xì)胞吞噬功能的測定2.大吞噬細(xì)胞的檢測第三節(jié)細(xì)胞因子的檢測一、細(xì)胞生物學(xué)活性檢測法二、免疫學(xué)標(biāo)記技術(shù)法三、分子生物學(xué)方法人類干擾素的檢測白細(xì)胞介素-1（IL-1）的檢測腫瘤壞死因子（TNF）的檢測第四節(jié)分子生物技術(shù)在免疫檢測中的應(yīng)用一、分子雜交技術(shù)二、轉(zhuǎn)基因技術(shù)三、多聚酶鏈反應(yīng)