《疫細(xì)胞功能測(cè)定》PPT課件

《《疫細(xì)胞功能測(cè)定》PPT課件》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。

1、醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)病原生物學(xué)與免疫學(xué)教研室sqjcbwm@163.comTel:03733831083第三講:免疫細(xì)胞功能測(cè)定主要內(nèi)容中性粒細(xì)胞吞噬功能實(shí)驗(yàn)E花環(huán)形成實(shí)驗(yàn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)單個(gè)核巨嗜細(xì)胞吞噬功能實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一中性粒細(xì)胞吞噬功能實(shí)驗(yàn)【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹渴煜ぶ行粤＜?xì)胞的吞噬作用原理和方法通過(guò)本實(shí)驗(yàn)理解機(jī)體的非特異性免疫機(jī)制【實(shí)驗(yàn)原理】吞噬作用（phagocytosis）：是指細(xì)胞從周?chē)h(huán)境攝取固體顆粒（如：微生物或較大的細(xì)胞殘片）的活動(dòng)血液中的中性粒細(xì)胞是一種小吞噬細(xì)胞，通過(guò)趨化、調(diào)理、吞入和殺菌等步驟，能吞噬和消化衰老、死亡細(xì)胞

2、及病原微生物等異物，是機(jī)體非特異性免疫的重要組成部分【實(shí)驗(yàn)原理】吞噬細(xì)胞（phagocyte）：主要包括中性粒細(xì)胞（neutrophil）和單核吞噬細(xì)胞（mononuclearphagocyte）兩類(lèi)大吞噬細(xì)胞吞噬細(xì)胞的分類(lèi)小吞噬細(xì)胞大吞噬細(xì)胞來(lái)源：?jiǎn)魏司奘杉?xì)胞存在部位：血液（單核細(xì)胞)、全身結(jié)締組織及小血管的基底膜組織（巨噬細(xì)胞）功能基礎(chǔ)：富含溶酶體及線粒體功能：吞噬病原微生物（寄生蟲(chóng)等），死亡細(xì)胞反應(yīng)時(shí)間及壽命：反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)（48h），壽命長(zhǎng)小吞噬細(xì)胞來(lái)源：血液的中性粒細(xì)胞存在部位：血液、炎癥部位（全身）功能基礎(chǔ)：溶酶體，過(guò)氧

3、化物酶及殺菌物質(zhì)功能：主要吞噬化膿菌反應(yīng)時(shí)間及壽命：反應(yīng)時(shí)間短，數(shù)分鐘到幾小時(shí)，壽命短，平均數(shù)小時(shí)吞噬過(guò)程示意圖中性粒細(xì)胞的吞噬作用吞噬過(guò)程【實(shí)驗(yàn)器材】1、無(wú)菌肉湯，白葡菌液，PBS緩沖液，瑞氏-姬姆薩染液2、注射器,解剖器材,玻片,顯微鏡等【實(shí)驗(yàn)方法】1.誘導(dǎo)：實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)給小白鼠腹腔注射(頭低位、曲形進(jìn)針)無(wú)菌淀粉肉湯2ml，誘導(dǎo)漿液滲出2.注射：給小白鼠腹腔內(nèi)注射白葡菌液1ml，輕揉腹部，讓小鼠活動(dòng)3.取樣：注射后30分鐘處死小白鼠，抽取腹腔液涂片4.干燥：室溫或者放溫箱中完全干燥標(biāo)本5.瑞氏-姬姆薩染液染色：滴加3滴A液

4、于標(biāo)本上，以完全蓋住標(biāo)本為宜，染色40秒。滴加8滴B液，用洗耳球吹出微風(fēng)使液面產(chǎn)生漣漪，使兩液充分混勻，染色5分鐘。水洗（勿先倒掉染液，應(yīng)以流水沖去）。吸水紙拍干水分，干燥。6.油鏡鏡檢油鏡使用鏡油的原理光線丟失光線保留油鏡的使用方法低倍鏡找到視野后，下降載物臺(tái)，滴加香柏油，調(diào)節(jié)物鏡使用油鏡鏡頭，從側(cè)面觀察，用“粗調(diào)節(jié)器”上升載物臺(tái)至物鏡鏡頭浸入油內(nèi)（有些鏡頭可以伸縮）；從目鏡觀察，用粗調(diào)節(jié)器下降載物臺(tái)，在此過(guò)程中可能會(huì)有比較清晰的視野一閃而過(guò)，此時(shí)，立即停止并調(diào)節(jié)“細(xì)調(diào)節(jié)器”倒回，調(diào)整后就可以看到比較清晰的視野前后左右調(diào)節(jié)載物

5、臺(tái)，尋找滿意視野下降載物臺(tái)，去載玻片，用擦鏡紙和擦鏡液擦油鏡鏡頭油鏡找視野油鏡找細(xì)胞收顯微鏡低倍鏡找視野【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】小吞噬大吞噬實(shí)驗(yàn)二E花環(huán)形成實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理CD2是人T細(xì)胞獨(dú)特的表面標(biāo)志。在一定的條件下，綿羊紅細(xì)胞（SRBC）與T細(xì)胞表面的CD2結(jié)合，使SRBC環(huán)繞在T細(xì)胞的周?chē)纬擅倒寤拥募?xì)胞團(tuán)。E花環(huán)實(shí)驗(yàn)原理示意圖+油鏡下E花環(huán)形態(tài)E花環(huán)電鏡照片【臨床意義】E花環(huán)形成實(shí)驗(yàn)可作為人外周血T細(xì)胞的鑒定和計(jì)數(shù)，同時(shí)作為人細(xì)胞免疫功能狀態(tài)的一個(gè)檢測(cè)指標(biāo)，也是分離T細(xì)胞的常用方法之一。E花環(huán)形成實(shí)驗(yàn)應(yīng)用最廣泛的是總E花環(huán)實(shí)驗(yàn)（Et

6、）以及活性E花環(huán)實(shí)驗(yàn)（Ea）。【臨床意義】E花環(huán)形成率=E花環(huán)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/總T細(xì)胞數(shù)×100%正常值為68±9.9%E花環(huán)降低：免疫缺陷性疾病、病毒感染E花環(huán)增高：甲亢、慢性肝炎、移植排斥反應(yīng)實(shí)驗(yàn)三淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)淋巴細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)，當(dāng)受到非特異刺激物如植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）、美洲商陸（PWM）等有絲分裂原刺激后，轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞并且發(fā)生特征性的形態(tài)變化【實(shí)驗(yàn)原理】【實(shí)驗(yàn)原理】轉(zhuǎn)化和未轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞的形態(tài)特征體積（直徑μm）：6-8；胞核：不增大，多位于中央；致密團(tuán)聚；無(wú)核仁；無(wú)有絲分裂；胞漿；較少；無(wú)

7、空泡；無(wú)偽足體積（直徑μm）：12-16；胞核：增大，多位于中央或稍偏；較疏松；有或無(wú)核仁；無(wú)有絲分裂；胞漿；較多；有或無(wú)空泡；有或無(wú)偽足體積（直徑μm）：12-20；胞核：增大，多偏向一側(cè)；疏松；1-4個(gè)核仁；偶見(jiàn)有絲分裂；胞漿；豐富；有空泡；有偽足淋巴母細(xì)胞lymphocytoblast淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率轉(zhuǎn)化率＝已轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞數(shù)淋巴細(xì)胞總數(shù)×100％臨床意義【正常參考值】形態(tài)學(xué)檢查法：70%左右LTT50%～60%為轉(zhuǎn)化偏低；LTT＜50%為轉(zhuǎn)化低下。由PHA刺激而測(cè)得的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率可反映受試者T細(xì)胞總體水平的應(yīng)答功能。臨床

8、意義LTT＞正常值，見(jiàn)于Down綜合癥LTT＜正常值，見(jiàn)于細(xì)胞免疫缺陷或功能低下者，如運(yùn)動(dòng)失調(diào)性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥、惡性腫瘤、何杰金氏病、淋巴瘤、淋巴肉芽腫等實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果：繪出大吞噬、小吞噬、E花環(huán)、轉(zhuǎn)化后的淋巴細(xì)胞鏡下圖思考題：免疫細(xì)胞功能測(cè)定