《肌糖元的酵解作用》PPT課件

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1、肌糖元的酵解作用實驗?zāi)康?.學(xué)習(xí)檢定糖酵解作用的原理和方法2.了解糖酵解作用在糖代謝過程中的地位及生理意義實驗原理在動物、植物、微生物等許多生物機體內(nèi)，糖的無氧分解幾乎都按完全相同的過程進行，本實驗以動物肌肉組織中肌糖元的酵解過程為例。肌糖元的酵解作用，即肌糖元在缺氧的條件下，經(jīng)過一系列的酶促反應(yīng)最后轉(zhuǎn)變成乳酸的過程。肌肉組織中的肌糖元首先與磷酸化合而分解，經(jīng)過己糖磷酸脂、丙糖磷酸脂、丙酮酸等一系列中間產(chǎn)物，最后生成乳酸。該過程可綜合在下列反應(yīng)式：1/n（C6H5O5）n＋H2O→2CH3CHOHCOOH糖元乳酸肌糖元的酵解作用是糖類供給組織能量的一種方式。當(dāng)機體突然需要大量

2、的能量，而又供氧不足（如劇烈運動時），則糖元的酵解作用暫時滿足能量消耗的需要。在有氧條件下，組織內(nèi)糖元的酵解作用受到抑制，而有氧氧化則為糖代謝的主要途徑。糖元酵解作用的實驗，一般使用肌肉糜或肌肉提取液。在用肌肉糜時，必須在無氧的條件下進行；而肌肉提取液，則可在有氧條件下進行。因為，催化酵解作用的酶系統(tǒng)全部存在于肌肉提取液中，而催化呼吸作用（即三羧酸循環(huán)）的酶系統(tǒng)，則集中在線粒體中，糖元可用淀粉代替。淀粉存在于綠色植物的多種組織中（種子、塊莖、干果）。糖元是動物和細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)糖及其所反應(yīng)的能源的一種儲存形式，其作用與淀粉在植物中的作用一樣，故有“動物淀粉”之稱。糖元或淀粉的酵解作

3、用，可由乳酸的生成來觀察，在除去蛋白質(zhì)與糖以后，乳酸可以與硫酸共熱變成乙醛，后者再與對羥基聯(lián)苯反應(yīng)產(chǎn)生紫紅色物質(zhì)，根據(jù)顏色的顯現(xiàn)而加以鑒定。該法比較靈敏，每毫升溶液含1-5μg乳酸即產(chǎn)生明顯的顏色反應(yīng)，若有大量糖類和蛋白質(zhì)等雜質(zhì)存在，則嚴(yán)重干擾測定結(jié)果，因此，實驗中應(yīng)盡量除凈這些物質(zhì)。另外，測定時所用的儀器應(yīng)嚴(yán)格地洗滌干凈。試劑和器材1.材料家兔的肌肉2.試劑（1）0.5%糖元溶液（或0.5%淀粉溶液）、液體石蠟、15%偏磷酸溶液、氫氧化鈣（粉末）、濃硫酸、飽和硫酸銅溶液。（2）1/15mol/L磷酸二氫鉀溶液（pH8.0）1/15mol/L磷酸二氫鉀溶液（pH7.4）(3)

4、對羥基聯(lián)苯試劑；3.器材試管及試管架、移液管（5ml、2ml、1ml、0.5ml）、滴管、量筒（10ml）、玻璃棒、恒溫水浴、小臺秤、剪刀及鑷子、研缽、冰浴、表面皿、橡皮塞。操作方法1.制備肌肉糜：將家兔殺死后，立即剝皮，割取背部和腿部肌肉，在低溫條件下用剪刀盡量把肌肉剪碎即成肌肉糜，低溫保存?zhèn)溆茫ㄅR用前制備）。2.肌肉的糖酵解:取4支試管，編號后各加入6ml磷酸緩沖液(pH7.4)和2ml0.5%淀粉溶液。1、2號管為實驗管；3、4號管為對照管。向?qū)φ展軆?nèi)加入15%偏磷酸4ml（沉淀蛋白質(zhì)并終止酶反應(yīng)）。然后，在每支試管中加入新鮮肌肉糜2g,用玻璃棒將肌肉碎塊打散，攪勻，再

5、分別加入少許液體石蠟（約1ml/管），使它在液面形成一薄層以隔絕空氣，并將4支試管同時放入37℃恒溫水浴中保溫。2h后，取出試管，立即向試驗管內(nèi)加入15%偏磷酸4ml，混勻。將各試管內(nèi)容物離心(3000r/min,15min)，棄去沉淀。量取每個樣品的濾液4ml，分別加入已編號的試管中，然后向每管內(nèi)加入飽和硫酸銅溶液2ml，混勻，再加0.8g氫氧化鈣粉末，塞上橡皮塞后用力振蕩。因皮膚上有乳酸，勿使手指接觸，放置30min，并不時振蕩，使糖沉淀完全。將每個樣品離心(3000r/min,15min)，棄去沉淀。3.乳酸的測定:取4支潔凈、干燥的試管，編號，各加入濃硫酸1.5ml和

6、4-8滴對羥基聯(lián)苯試劑，混勻后放入冰浴中冷卻。將每個樣品的濾液0.5ml逐滴加入到已冷卻的上述濃硫酸與對羥基聯(lián)苯混合液中，邊加邊搖動冰浴中的試管，應(yīng)注意冷卻。將試管內(nèi)液體混合均勻，放入沸騰的水浴鍋中煮沸10min，冷卻后，比較和記錄各管溶液的顏色深淺，并加以解釋。脂肪轉(zhuǎn)化為糖的定性實驗實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)和了解生物體內(nèi)脂肪轉(zhuǎn)化為糖的基本原理、檢驗方法和生理意義。實驗原理糖代謝、脂肪代謝和蛋白質(zhì)代謝是相互聯(lián)系的，三類物質(zhì)可以互相轉(zhuǎn)化。本實驗以休眠的花生種子和花生的黃化幼苗為材料，定性地了解花生種子內(nèi)貯存的大量的脂肪轉(zhuǎn)化成為黃化幼苗中還原糖的現(xiàn)象。試劑和器材1.材料花生籽、花生的黃化幼苗

7、（在25℃暗室中培養(yǎng)8天）。2.試劑費林試劑、碘化鉀—碘溶液。3．器材試管及試管架、竹試管夾、研缽、燒杯（100ml）、小漏斗、移液管及移液管架、量筒、水浴鍋。操作方法取5粒花生、剝?nèi)ネ鈿ぃ旁谘欣徶心胨槌煞N糊。取少量種糊放在白瓷板上，加1滴碘化鉀-碘溶液，觀察有無藍(lán)色產(chǎn)生？說明了什么？將剩下的種糊放在小燒杯中，加入40ml蒸餾水，直接加熱煮至沸騰，過濾。取1支試管。加入2ml濾液和3ml費林試劑，混勻，在沸水浴中煮2-3min,觀察是否出現(xiàn)紅色沉淀？說明了什么？另外，取5棵黃化幼苗，按上述方法碾碎，取