《葡萄糖濃度的測定》PPT課件

《《葡萄糖濃度的測定》PPT課件》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。

1、葡萄糖濃度的測定考試實驗?zāi)康募耙笳莆锗徏妆桨贩ǚy定葡萄糖含量的原理和方法。學(xué)會取液器及紫外分光光度計的使用。了解葡萄糖濃度測定的意義。實驗儀器及試劑772型分光光度計；試管；移液管；水浴鍋。鄰甲苯胺試劑：硫脲2.5g，鄰甲苯胺150ml及2.4%硼酸100ml，用冰醋酸溶解，在1000ml容量瓶內(nèi)調(diào)至到刻度。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯存液：10mg/ml。葡萄糖濃度測定的意義正常人血糖濃度在神經(jīng)和激素調(diào)節(jié)下維持相對恒定。當(dāng)調(diào)節(jié)因素失去平衡時出現(xiàn)高血糖或低血糖。病理性高血糖見于胰島α-細(xì)胞瘤等疾病。病理性低血糖見于胰島β-細(xì)胞瘤、垂體機能減退、腎上腺皮質(zhì)機能減退、甲狀腺

2、機能減退、及肝壞死、糖原累積癥等疾病。測定葡萄糖濃度的方法Folin-吳憲法：利用葡萄糖的還原性，在與堿性銅試劑共熱時，是銅離子還原成亞銅離子。鄰甲苯胺法：利用醛糖在熱醋酸溶液中與苯胺類縮合生成青色的Schiff堿。葡萄糖氧化酶法：利用葡萄糖氧化酶對葡萄糖的氧化作用。Folin-吳憲法歷史中國旅美生化和分子生物學(xué)家吳憲在美國哈佛大學(xué)OttoFolin教授指導(dǎo)下，完成了題為“一個血液分析系統(tǒng)”的博士論文；Folin與吳憲建立的無蛋白血濾液制備，血糖、非蛋白氮、尿素、肌酐、肌酸等測定方法，奠定了血液化學(xué)分析的基礎(chǔ)；其中以“Folin－吳憲法”著稱，在1920到1

3、950年間用于世界上許多病人的診斷和治療的追蹤。OttoFolinHsienWuFolin-吳憲法原理葡萄糖的半縮醛羥基具有還原性，在加熱條件下可使堿性銅試劑中的Cu2+還原為黃色的氧化亞銅沉淀，而其本身被氧化為羧基。氧化亞銅可使磷鉬酸還原成藍色的鉬藍，藍色的深度與葡萄糖的濃度成正比，故可用比色法測定鉬藍的光吸收值來測定葡萄糖的濃度。葡萄糖氧化酶法原理醌亞胺在480-550nm范圍內(nèi)有最大吸收峰，且醌亞胺的量與葡萄糖的量成正比，利用比色法測定醌亞胺的量即可計算出血糖的含量。鄰甲苯胺法原理葡萄糖在熱醋酸溶液中脫水后與鄰甲苯胺縮合，生成青色的Schiff堿，其顏

4、色深淺與葡萄糖含量成正比，其反應(yīng)式如下：葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液制備取10ml容量瓶6只，分別編號①、②、③、④、⑤；依次加入葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯存液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml；以H2O稀釋至10ml，混勻以上葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度分別為50、100、200、300、400mg/100ml。實驗步驟123456測定管鄰甲苯胺試劑（ml）5.05.05.05.05.05.05.0樣品（ml）00.1①0.1②0.1③0.1④0.1⑤0.1蒸餾水（ml）0.1000000樣品試劑混勻后置沸水浴中煮沸15分鐘，取出置冷水中冷卻。用分光光度計在波長630nm處進行比色，以“

5、1”管作空白校零，讀取各管吸光度。實驗步驟數(shù)據(jù)處理以吸光度為縱坐標(biāo)，相應(yīng)管中的葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)，以樣品“2”“3”“4”“5”“6”為基礎(chǔ)在坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)測定管的吸光度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到未知樣品中的葡萄糖濃度。實驗注意事項測定血糖必須采用空腹血。若用抗凝血最好采用氟化鈉抗凝劑。鄰甲苯胺法，試劑酸度很大，操作過程需謹(jǐn)慎。取加熱試管時務(wù)必當(dāng)心燙傷。思考題血糖測定有何臨床價值？三種測定方法各有何優(yōu)缺點？