《生化分析方法熊》PPT課件

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1、指導老師：張宏姓名：熊昱生化分析簡述什么叫生化分析什么叫生化分析，我們可以這樣理解：用生物、化學的原理和方法，研究生命現(xiàn)象的分析方法。研究生物體的化學組成、代謝、營養(yǎng)、酶功能、遺傳信息傳遞、生物膜、細胞結構及分子病等等，闡明生命現(xiàn)象。生化分析是進行生命科學研究的一個重要手段，在生物醫(yī)藥研發(fā)、臨床生化診斷、生化產(chǎn)品生產(chǎn)等領域起著越來越重要的作用，是一門理論與實踐相結合的綜合性技術。發(fā)展進程從早期對生物總體組成的研究。進展到對各種組織和細胞成分的精確分析。目前正在運用諸如光譜分析、同位素標記、X射線衍

2、射、抗原抗體反應、酶交聯(lián)的免疫吸附法、其他物理學、化學技術，對重要的生物大分子（如蛋白質(zhì)、核酸等）進行分析，以期說明這些生物大分子的多種多樣的功能與它們特定的結構關聯(lián)對不同的對象，有不同的分析方法，要達到不同的目的，也要使用不同的分析方法，因此分析方法也就多種多樣，在這里我就講蛋白質(zhì)的分析方法概述，拋磚引玉氨基酸蛋白質(zhì)的分析方法生物體中廣泛存在的一類生物大分子，由核酸編碼的α氨基酸之間通過α氨基和α羧基形成的肽鍵連接而成的肽鏈，經(jīng)翻譯后加工而生成的具有特定立體結構的、有活性的大分子。泛指某一類蛋白

3、質(zhì)，與前面的限定詞組成復合詞時，一律用“蛋白質(zhì)”，如血漿蛋白質(zhì)、纖維狀蛋白質(zhì)、酶蛋白質(zhì)等，此時“質(zhì)”字不得省略(習慣詞除外，新命名者從此)。凡指具體蛋白質(zhì)時，“質(zhì)”字可省略，如血紅蛋白、肌球蛋白等。蛋白質(zhì)四聚體(四級結構)1.氨基酸類藥物分析藥典中氨基酸含量測定大多應用化學滴定法,只有美國藥典中乙酰半胱氨酸采用高教液相色譜法(HPLC)。但近年來HPLC已廣泛應用于氨基酸分析,其中令人關注的是有關氨基酸的衍生化，因為只有極少數(shù)氨基酸具有紫外吸收,大多數(shù)氨基酸不能用紫外檢測器檢測。為改善被測物的檢測

4、特性，提高檢測靈敏度，必須采用化學衍生法。目前衍生方法大致有兩種：柱前衍生和柱后衍生。1.1柱前衍生法柱前衍生法是將樣品制成適當?shù)难苌镌龠M行HPLC分離，衍生化的結果不僅僅改善了被測物的檢測特性，有時對其色譜分離也有一定的幫助，常用衍生化試劑有鄰苯二甲醛、羥基琥珀酸亞胺一吲哚乙酸(SIIA)、苯氨基硫代甲酰酯(PTC)。有科學家分別用亞硝酸和N芘基馬來酰亞胺作為衍生化試劑．以紫外和熒光作檢測的反相高效液相法(RPHPLC)定量測定人體內(nèi)乙酰半胱氨酸，獲得到滿意結果。1.2柱后衍生法柱后衍生法是將

5、樣品先經(jīng)色譜柱分離，柱后再進行衍生。Nozal等將乙酰半胱氨酸經(jīng)RPHPLC分離后，用二硫硝基苯酸衍生處理再進行檢測，同時加入溴化十六烷基三甲銨陽離子以增強靈敏度，檢測限為0.6μg。得到了滿意的結果1.3其他衍生方式除了以上兩種經(jīng)典衍生方式外，最近有文獻“介紹了用于定量分析氨基酸的一種毛細管柱內(nèi)衍生方法，可在緩沖液中加入衍生劑(Online法)，也可在毛細管前端的衍生室進行反應(Sandwich法)，這種方法與柱前衍生法檢測水平相當(微克級)此外，還可用蒸發(fā)光散射檢測器直接檢測非衍生化的氨基酸，

6、配合HPLC的分離定量，檢測限達納克級，回收率為94%2酶類分析酶的種類極多，目前研究發(fā)現(xiàn)的酶已達1300多種，它們都是機體細胞中合成的蛋白質(zhì)，具有高度的催化作用及選擇性；雖為活體產(chǎn)生，但自活體提出后，仍不失其催化活性個，因此某些酶經(jīng)提取后，可作為藥用?，F(xiàn)有藥用酶制劑已達100種，。·酶類藥物分析基本上還是應用生化反應方法，生化物質(zhì)為底物，輔以紫外分光光度法(UV)，反映酶解反應的程度，測定酶效價。映酶解反應的程度，近年來，人們嘗試用一些新的生化反應底物使反應更加靈敏和準確超氧化物歧化酶超氧化物歧

7、化酶(SuperoxideDismutase，簡稱SOD)是一種十分重要的生物體防止氧化損傷的酶類，是生物體內(nèi)超氧陰離子清除劑，保護細胞免受損傷。SOD廣泛存在于各類生物體內(nèi)，所有好氧微生物細胞中都含有SOD。自1969年Mccord等人首次發(fā)現(xiàn)了SOD生物活性后，醫(yī)學界對其醫(yī)療作用做了許多研究，證明它具有抗衰老、抗腫瘤、抗輻射、抗缺血、提高人體免疫力等作用，被專家稱為21世紀最有前途的藥用酶。歐美國家已開始將其應用于醫(yī)療、食品、保健、化妝品等領域?！久富顪y定】在25℃4.5ml50mmol／Lp

8、H8.3的K2HPO4-KH2PO4緩沖液中加入待測SOD樣液，再加入10ul50mmol／L的連苯三酚，迅速搖勻，倒入光徑lcm的比色杯，在325nm波長下每隔30s測一次A值。同時測定Sigma公司的SOD標準品，對所測樣品SOD活性進行校正?！久富疃x】在1ml反應液中，每分鐘抑制連苯三酚自氧化速率達50％時的酶量為一個酶活單位，即325nm0.035OD／min為一個酶活單位。Jones應用硫代氨基甲酰--酪蛋白熒光底物使胰蛋白酶、胃蛋白酶的檢測靈敏度提高了幾十倍；張東裔等