《生物碩士畢業(yè)答辯》PPT課件

ID:39629967

大?。?56.10 KB

頁數(shù):23頁

時間:2019-07-07

《生物碩士畢業(yè)答辯》PPT課件_第1頁
《生物碩士畢業(yè)答辯》PPT課件_第2頁
《生物碩士畢業(yè)答辯》PPT課件_第3頁
《生物碩士畢業(yè)答辯》PPT課件_第4頁
《生物碩士畢業(yè)答辯》PPT課件_第5頁
資源描述:

《《生物碩士畢業(yè)答辯》PPT課件》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關內容在教育資源-天天文庫

1、脂聯(lián)素基因去信號肽區(qū)原核表達及酶免檢測方法研究專業(yè):微生物學學生:孫強導師:王云龍教授主要內容研究背景目的及意義實驗技術路線方法與結果創(chuàng)新與結論研究背景脂肪細胞中發(fā)現(xiàn)的唯一與肥胖呈負相關性的特異性血漿蛋白。肥胖、冠心病、Ⅱ型糖尿病患者血漿中的脂聯(lián)素低于正常水平。編碼人脂聯(lián)素的apMI基因定位于染色體3q27上,長度為16kbp,包含3個外顯子和2個內含子。人脂聯(lián)素由244個氨基酸組成,由分泌信號序列、特異序列、膠原重復序列、球狀序列等4個結構域組成,其中球狀區(qū)(gADPN)是脂聯(lián)素生物活性的關鍵部位。

2、脂聯(lián)素(adiponectin)目的及意義可作為冠心病、糖尿病的輔助診斷依據(jù),并對疾病發(fā)生進行有效的預警;可作為評價藥物在治療肥胖、冠心病和糖尿病疾病方面的效果;進一步研究脂聯(lián)素作用機制提供方便;利用基因工程方法制備脂聯(lián)素定量檢測試劑盒中的標準品,提高了穩(wěn)定性和生物安全性。本研究建立的血漿脂聯(lián)素酶免定量檢測方法——實驗技術路線方法與結果(一)人脂聯(lián)素基因去信號肽區(qū)的克隆與鑒定方法與結果(一)總RNA濃度=OD260×稀釋倍數(shù)×40μg/mlOD280=0.254,OD260=0.485RNA含量=0.

3、485×1×40=19.4μg/mL純度=OD260/OD280=0.485/0.254=1.910人脂肪組織總RNA的提取方法與結果(一)2、PCR擴增目的基因(678bp)M.DNAMarkerDL2000;1.PCRproduct;2.Negativecontrol3、重組質粒酶切鑒定M.DNAmarkerDL2000;1.BamHⅠ+XhoⅠdigestionproductsbpM1220001000750500250100bpM120001000750500250100重組ΔSADPN蛋白的

4、誘導表達及純化方法與結果(二)方法與結果(二)1、重組菌BL21(DE3)/pET41a/ΔSADPN誘導表達(54.5kD)M..ProteinmoleculeweightMarker;1.Normalcelllysatescontrol;2.celllysatesinducedat25℃for6hours;3.Supernatantofcelllysatesinducedat25℃for6hours;4.Precipitationofcelllysatesinducedat25℃for6hours

5、;KDM123497.266.444.329.020.1方法與結果(二)2、重組ΔSADPN蛋白活性鑒定3、重組ΔSADPN蛋白誘導表達條件的優(yōu)化誘導溫度的優(yōu)化M.ProteinmoleculeweightMarker;1~3.Supernatantofcelllysatesinducedat25℃30℃37℃4~6.Precipitationofcelllysatesinducedat25℃30℃37℃KDM12345697.266.444.329.020.1誘導時間的優(yōu)化1~4.Supernata

6、ntofcellllysatesinducedat25℃for(4/6/8/10)hours5~8.Precipitationofcelllysatesinducedat25℃for(4/6/8/10)hours方法與結果(二)12345678誘導劑濃度的優(yōu)化1~4.Supernatantofcelllysatesinducedat25℃for(0.10/0.05/0.03/0.02)mol/LIPTG5~8.Precipitationofcelllysatesinducedat25℃for(0.10

7、/0.05/0.03/0.02)mmol/LIPTG方法與結果(二)12345678方法與結果(二)M..ProteinmoleculeweightMarker;1.Sampleofimpurification;2.Elutionproductswith20mmol/LImidazole;3.Elutionproductswith50mmol/LImidazole;4.Elutionproductswith100mmol/LImidazole;5.Elutionproductswith200mmol/

8、LImidazole.4、重組ΔSADPN蛋白的純化KDM1234597.266.444.329.020.1方法與結果(三)雙抗體夾心ELISA檢測方法的初步建立方法與結果(三)1、檢測標準品的制備2、標準品穩(wěn)定性試驗t=1.112,顯著性概率(Sig.)P=0.309>0.05,表明在2~8℃和37℃放置144h檢測結果沒有顯著性差異,制備的標準品穩(wěn)定性較好。方法與結果(三)3、包被抗體和檢測抗體最佳濃度的選擇方法與結果(三)4、檢測標準曲線的繪制方法

當前文檔最多預覽五頁,下載文檔查看全文

此文檔下載收益歸作者所有

當前文檔最多預覽五頁,下載文檔查看全文
溫馨提示:
1. 部分包含數(shù)學公式或PPT動畫的文件,查看預覽時可能會顯示錯亂或異常,文件下載后無此問題,請放心下載。
2. 本文檔由用戶上傳,版權歸屬用戶,天天文庫負責整理代發(fā)布。如果您對本文檔版權有爭議請及時聯(lián)系客服。
3. 下載前請仔細閱讀文檔內容,確認文檔內容符合您的需求后進行下載,若出現(xiàn)內容與標題不符可向本站投訴處理。
4. 下載文檔時可能由于網絡波動等原因無法下載或下載錯誤,付費完成后未能成功下載的用戶請聯(lián)系客服處理。
关闭