《疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)概述》PPT課件

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1、第九章免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)概述血清學(xué)反應(yīng)：體外發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)。第一節(jié)體液免疫的檢測(cè)——血清學(xué)反應(yīng)所有血清學(xué)反應(yīng)類型的基本原理：抗原抗體反應(yīng)的特異性。二、血清學(xué)反應(yīng)的一般規(guī)律(一)特異性Ab只能與相應(yīng)Ag特異結(jié)合。Ag表面常具有多個(gè)(多種)不同表位，所以免疫血清中也應(yīng)含有相應(yīng)多種特異性Ab?？乖c抗體的結(jié)合的特異性（二）交叉性交叉抗原：不同的Ag物質(zhì)之間存在相同的Ag表位時(shí)，稱為交叉抗原。交叉反應(yīng)：又不同抗原制備的抗血清除與各自的相應(yīng)Ag發(fā)生反應(yīng)外，尚能與對(duì)方Ag發(fā)生反應(yīng)。通常兩種Ag之間親緣關(guān)系越近，交叉反應(yīng)程度越高。AB抗原

2、與抗體的結(jié)合的交叉性(三)用已知測(cè)未知所有血清學(xué)反應(yīng)都毫無例外地是用已知Ag測(cè)未知Ab或用已知Ab測(cè)未知Ag。用已知測(cè)未知的依據(jù)：抗原抗體的反應(yīng)是特異的。正確理解實(shí)驗(yàn)原理或進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)的關(guān)鍵是搞清楚什么是已知，什么是未知，誰是抗原身份，誰是抗體身份，誰是身兼兩職的。(四)試驗(yàn)與抑制試驗(yàn)許多血清學(xué)試驗(yàn)可以被相應(yīng)的Ag／Ab所抑制，即抑制反應(yīng)現(xiàn)象的出現(xiàn)，抑制試驗(yàn)可以驗(yàn)證反應(yīng)的特異性；還可使一些不易被檢測(cè)的Ag(如簡(jiǎn)單半Ag)或Ab(如單價(jià)Ab)，得以檢出。(五)結(jié)合力與離解力Ag，Ab的結(jié)合為弱能量的非共價(jià)健結(jié)合，其結(jié)合力決定于

3、Ag表位與Ab的結(jié)合點(diǎn)之間所形成的非共價(jià)健的數(shù)量，性質(zhì)和距離，包括4種力的作用：Ag-Ab結(jié)合的離解力指Ag-Ab結(jié)合具有可逆性，因?yàn)锳g-Ab之間靠非共價(jià)結(jié)合，因此在一定條件下可使其解離。解離后的Ag-Ab仍保留其原有活性。(六)結(jié)合比例Ag與Ab的結(jié)合常需適當(dāng)比例才出現(xiàn)可見反應(yīng)，在最適比例時(shí)反應(yīng)最明顯；這種現(xiàn)象可以用“格子學(xué)說”來解釋：Ab(1gG)為二價(jià)，Ag通常為多價(jià)，只有Ag，Ab結(jié)合形成大的復(fù)合物，肉眼才可見；帶現(xiàn)象只有當(dāng)Ag與Ab比例適當(dāng)時(shí)，才能形成大的復(fù)合物，比例不適當(dāng)，就只能形成小的復(fù)合物而抑制反應(yīng)現(xiàn)象的出

4、現(xiàn).前帶現(xiàn)象：Ab過剩，Ag過少；稀釋Ab后帶現(xiàn)象：Ag過剩，Ab過少；稀釋Ag。(七)血清學(xué)反應(yīng)的影響因素1．電介質(zhì)：生理鹽水，緩沖鹽水，少數(shù)動(dòng)物(禽)血清用8.5％NaCl；2．溫度；3．pH：pH6.0～8.0三、血清學(xué)技術(shù)的優(yōu)越性(一)檢樣量少，預(yù)處理簡(jiǎn)單：一滴血清/血、一根羽毛、少許組織懸液、植物一片子葉等。(二)種類多，可擇優(yōu)選用(三)方法簡(jiǎn)便快速(四)特異性、敏感性(五)Ag/Ab定位、定量四、血清學(xué)試驗(yàn)的制定原則特定的或建立新的血清學(xué)方法時(shí)，應(yīng)注意以下原則：(一)Ag準(zhǔn)備和提純1．購(gòu)自試劑公司：如半Ag、激素

5、、酶、農(nóng)藥、抗生素、昂貴的天然Ag等。2．自制：一般天然Ag、動(dòng)物血清、組織Ag等(二)Ab制備提純(三)操作程序制定(四)材料準(zhǔn)備和滴定：工作濃度滴量(五)試驗(yàn)條件選擇：(六)特異性試驗(yàn)1．Ag、Ab驗(yàn)證：反復(fù)、重復(fù)驗(yàn)證2．交叉試驗(yàn)3．抑制試驗(yàn)(阻斷)(七)敏感性試驗(yàn)(八)重復(fù)性試驗(yàn)(九)穩(wěn)定性試驗(yàn)五、血清學(xué)試驗(yàn)的應(yīng)用(一)血清學(xué)診斷(二)生物活性物質(zhì)超微定量(三)Ag/Ab亞細(xì)胞、細(xì)胞水平定位(四)Ag組分分析，如病毒結(jié)構(gòu)蛋白可用免疫轉(zhuǎn)印，免疫沉淀(瓊擴(kuò)、電泳、交叉免疫電泳等)(五)物種鑒定分型(六)有機(jī)物提取純化六、血

6、清學(xué)試驗(yàn)的類型（一）沉淀反應(yīng)：環(huán)狀沉淀試驗(yàn)瓊脂擴(kuò)散：免疫電泳對(duì)流電泳火箭電泳雙向電泳補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（二）凝集反應(yīng)：直接凝集：平板、試管間接凝集：間接血凝、炭凝、乳膠凝集協(xié)同凝集：凝集抑制：（血凝抑制）（三）與補(bǔ)體有關(guān)的實(shí)驗(yàn)：活性、組分、補(bǔ)結(jié)、免疫粘附血凝等。（四）中和試驗(yàn)（五）標(biāo)記技術(shù)：同位素標(biāo)記熒光標(biāo)記：化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)酶標(biāo)記：組化法、測(cè)定法（ELISA）ELISA：間接法、免疫酶斑點(diǎn)技術(shù)（dot-ELISA）、競(jìng)爭(zhēng)法、夾心法、橋聯(lián)法（六）免疫電鏡組化技術(shù)膠體金鐵蛋白標(biāo)記技術(shù)BB0競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法(CiELISA)原理

7、0ng/ml，檢測(cè)線為清晰紅色條帶；1ng/ml，檢測(cè)線與0標(biāo)準(zhǔn)品的相似;3ng/ml，檢測(cè)線淺于0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品;10ng/ml，檢測(cè)線明顯淺于0;肉眼判定檢測(cè)限可達(dá)3ng/ml。免疫層析法檢測(cè)CAP結(jié)果第二節(jié)細(xì)胞免疫技術(shù)自學(xué)