《疫學(xué)實(shí)驗(yàn)》PPT課件

《《疫學(xué)實(shí)驗(yàn)》PPT課件》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。

1、免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)課件生化與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室中性粒細(xì)胞的吞噬作用【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?.熟悉中性粒細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)的原理和方法。2.通過(guò)本實(shí)驗(yàn)理解機(jī)體的非特異性免疫機(jī)制?！緦?shí)驗(yàn)原理】中性粒細(xì)胞具有吞噬殺菌功能，當(dāng)與顆粒性物質(zhì)（如葡萄球菌等）混合孵育一定時(shí)間后，顆粒性物質(zhì)被吞噬殺滅，根據(jù)吞噬率、吞噬指數(shù)可反映該細(xì)胞的吞噬功能?！緦?shí)驗(yàn)材料】1.表皮（白色）葡萄球菌菌液（濃度6~10億/ml)。2.肝素溶液（25U/ml）；甲醇，堿性美藍(lán)（或瑞氏）染液。3.血紅蛋白吸管，凹玻片，載玻片，采血針，微量加樣器，濕盒，顯微鏡，恒溫培養(yǎng)箱，75%酒精，棉簽，香柏油，二甲苯等?！緦?shí)驗(yàn)方法】1、用微量加樣器，吸取肝素

2、20ul加入潔凈凹玻片凹孔內(nèi)。2、用酒精棉簽消毒手指后，刺破皮膚，以血紅蛋白吸管取血40ul，立即放入盛有肝素的凹玻片凹孔內(nèi)，并充分混勻。3、用微量加樣器取葡萄球菌菌液20ul加入上述凹玻片凹孔內(nèi)，充分混勻。4、將凹玻片置于濕盒內(nèi)，30℃溫箱中30min，其間每隔10min搖勻一次。5、取一小滴上述混合液，置于載玻片上，用另一載玻片推成薄血片，待干。6、滴加甲醇固定3min，水洗。7、加堿性美藍(lán)染色1~2min，水洗，印干。8、置油鏡下觀察吞噬和未吞噬的白細(xì)胞并計(jì)數(shù)?！緦?shí)驗(yàn)結(jié)果】【實(shí)驗(yàn)思考】1、在吞噬細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)細(xì)菌時(shí)，如何區(qū)別吞噬的細(xì)菌和粘附在吞噬細(xì)胞表面的細(xì)菌？2、簡(jiǎn)述機(jī)體

3、非特異性免疫的概念及特點(diǎn)。凝集反應(yīng)【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?．了解凝集反應(yīng)的原理、基本類型及其臨床意義。2．掌握玻片凝集實(shí)驗(yàn)、間接凝集實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果分析?！靖攀觥吭谝欢舛鹊碾娊赓|(zhì)溶液中，顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集塊，稱為凝集反應(yīng)。凝集反應(yīng)是一種定性的檢測(cè)方法，也可以進(jìn)行半定量檢測(cè)。凝集反應(yīng)可分為直接凝集反應(yīng)和間接凝集反應(yīng)。由于凝集反應(yīng)方法簡(jiǎn)便，目前在臨床檢驗(yàn)中仍被廣泛應(yīng)用。一、直接凝集反應(yīng)細(xì)菌、細(xì)胞等顆粒性抗原，在適當(dāng)電解質(zhì)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集，稱為直接凝集反應(yīng)。常用的凝集試驗(yàn)有玻片法和試管法兩種。玻片凝集試驗(yàn)——ABO血型鑒定玻片凝集試驗(yàn)為定性

4、試驗(yàn)，一般用已知抗體作為診斷血清，與受檢顆?？乖缇夯蚣t細(xì)胞抗原各加一滴在玻片上，混勻，數(shù)分鐘后即可用肉眼觀察凝集結(jié)果，出現(xiàn)凝集顆粒的為陽(yáng)性。此法簡(jiǎn)便，快速，適用于從病人標(biāo)本中分離得到的菌種的診斷或分型，也可用于紅細(xì)胞ABO血型的鑒定?！緦?shí)驗(yàn)原理】人類ABO血型抗原主要有A和B兩種，根據(jù)紅細(xì)胞表面這兩種抗原的有無(wú)可把血型分為四種。據(jù)此，將抗A和抗B抗體分別與待測(cè)紅細(xì)胞混合，抗A或（和）抗B抗體與紅細(xì)胞表面上的相應(yīng)抗原結(jié)合而引起紅細(xì)胞凝集，據(jù)其凝集情況便可判定出受試者的血型。ABO血型的劃分紅細(xì)胞表面Ag血清中AbA型A抗BB型B抗AAB型A、B—、—O型—、—抗A、抗B【

5、實(shí)驗(yàn)材料】1．ABO血型鑒定試劑盒　內(nèi)含抗A分型試劑和抗B分型試劑各1支。2．一次性采血針1枚、潔凈玻片2塊、75％酒精、滅菌棉簽。3．84消毒液3．用酒精棉簽消毒被檢者手指尖端，以采血針刺破皮膚，稍加擠壓，使血液流出。用另一載玻片一端取適量血液加入抗抗A分型試劑，并混勻；用另一端再取適量血液加入抗抗B分型試劑，并混勻。用干棉簽止血。4．觀察紅細(xì)胞有無(wú)凝集發(fā)生。如有凝集，可見(jiàn)紅細(xì)胞凝集成塊；無(wú)凝集，紅細(xì)胞呈均勻分散。判定結(jié)果后把玻片放入消毒液中。AB【實(shí)驗(yàn)方法】1．取潔凈載玻片1塊，并標(biāo)記（如圖）2．將抗A、B分型試劑分別加1滴于標(biāo)記有A、B的玻片兩側(cè)。抗A抗B抗A分型試劑側(cè)

6、抗B分型試劑側(cè)血型+—A—+B++AB——O“＋”表示紅細(xì)胞凝集，“－”表示紅細(xì)胞未凝集【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】記錄受檢者紅細(xì)胞凝集情況，根據(jù)ABO血型鑒定表(下表)，判斷受檢者的血型。ABO血型鑒定表二、間接凝集反應(yīng)將可溶性抗原或抗體先吸附于適當(dāng)大小的顆粒性載體表面（這種載體與免疫無(wú)關(guān)），然后與相應(yīng)抗體或抗原結(jié)合，在適量的電解質(zhì)存在下，出現(xiàn)特異性凝集現(xiàn)象，稱為間接凝集反應(yīng)。根據(jù)載體的不同可將間接凝集反應(yīng)分為：間接血細(xì)胞凝集試驗(yàn)、間接乳膠凝集試驗(yàn)（及間接乳膠凝集抑制試驗(yàn)）和金黃色葡萄球菌協(xié)同凝集試驗(yàn)等。間接凝集抑制試驗(yàn)——妊娠試驗(yàn)【實(shí)驗(yàn)原理】可溶性抗原致敏的乳膠顆粒與相應(yīng)抗體作用可使乳膠

7、顆粒凝集，此為間接乳膠凝集試驗(yàn)。若使抗體先與可溶性抗原作用，再加入該抗原致敏的乳膠顆粒，則乳膠凝集被抑制，此為間接乳膠凝集抑制試驗(yàn)。孕婦尿中絨毛膜促性腺激素（HCG）含量明顯增高。HCG與抗HCG抗體先作用后，再加入HCG致敏的乳膠顆粒，不出現(xiàn)凝集反應(yīng)，此為妊娠試驗(yàn)陽(yáng)性；非孕婦尿中HCG含量不足以消耗掉抗HCG抗體，抗體與后加入的HCG致敏乳膠結(jié)合呈現(xiàn)凝集現(xiàn)象，則妊娠試驗(yàn)陰性?！緦?shí)驗(yàn)材料】1．妊娠診斷試劑盒：內(nèi)含抗血清（抗HCG）、乳膠抗原（HCG致敏）各一支2．待檢尿、孕婦尿、正常尿。3．有格玻片和毛