生物化學(xué)普通生物化學(xué)

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1、生物化學(xué)（普通生物化學(xué)）考研答疑蛋白質(zhì)化學(xué)酶蛋白質(zhì)的分解和氨基酸代謝核酸化學(xué)核酸的分解和核苷酸代謝生物氧化一、蛋白質(zhì)的組成（元素組成，化學(xué)組成）二、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)（一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)、四級(jí)結(jié)構(gòu)）三、蛋白質(zhì)的性質(zhì)（等電點(diǎn)、分子量、膠體、沉淀反應(yīng)、顏色反應(yīng)、變性與復(fù)性）（一）蛋白質(zhì)的元素組成：C、H、O、N及少量的S特點(diǎn)：N在各種蛋白質(zhì)中的平均含量為16%因?yàn)闃悠泛科骄?6%，取其倒數(shù)100/16=6.25，即為蛋白質(zhì)換算系數(shù)，其含義是樣品中每存在1g元素氮，就說明含有6.25g蛋白質(zhì)）；故：凱氏定氮法蛋白質(zhì)含量=蛋白質(zhì)含氮量×6.25優(yōu)點(diǎn)：對(duì)原料無(wú)選擇性，儀器簡(jiǎn)單，

2、方法也簡(jiǎn)單。缺點(diǎn)：易將無(wú)機(jī)氮(如核酸中的氮)都?xì)w入蛋白質(zhì)中。(二）蛋白質(zhì)的水解1、完全水解：用濃酸、堿將蛋白質(zhì)完全水解為氨基酸。酸水解：無(wú)消旋作用，產(chǎn)物為L(zhǎng)-氨基酸。堿水解：多數(shù)氨基酸被破壞，有消旋現(xiàn)象。2、部分水解：一般用酶或稀酸在較溫和條件下，將蛋白質(zhì)分子切斷，產(chǎn)物為分子大小不等的肽段和氨基酸。（三）氨基酸氨基酸是蛋白質(zhì)水解的最終產(chǎn)物，是組成蛋白質(zhì)的基本單位。從蛋白質(zhì)水解物中分離出來(lái)的氨基酸有二十種，除脯氨酸和羥脯氨酸外，這些天然氨基酸在結(jié)構(gòu)上的共同特點(diǎn)為：(1)與羧基相鄰的α-碳原子上都有一個(gè)氨基，因而稱為α-氨基酸。(2)除甘氨酸外,其它所有氨基酸分子中的α-

3、碳原子都為不對(duì)稱碳原子。目前已知的天然蛋白質(zhì)中氨基酸都為L(zhǎng)-型。R（3）按R基團(tuán)的極性分：極性氨基酸：極性不帶電荷：絲、蘇、天冬酰胺、谷氨酰胺、酪、半胱、極性帶正電荷：組、賴、精、極性帶負(fù)電荷：天冬、谷、非極性氨基酸：甘、丙、纈、亮、異亮、苯丙、甲硫、脯、色、（4）按人體是否可合成來(lái)分：必需氨基酸：機(jī)體不能自身合成，必須由食物供給的氨基酸。甲硫、色、賴、纈、異亮、亮、苯丙、蘇、半必需氨基酸：人體可合成，但幼兒期合成速度不能滿足需要。組*、精*、非必需氨基酸：機(jī)體可自身合成的氨基酸。（5）氨基酸的重要理化性質(zhì)(1)光吸收：構(gòu)成蛋白質(zhì)的20種氨基酸在可見光區(qū)都沒有光吸收，

4、但在遠(yuǎn)紫外區(qū)(<220nm)均有光吸收。在近紫外區(qū)(220-300nm)只有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸有吸收光的能力。酪氨酸的?max＝275nm，苯丙氨酸的?max＝257nm，色氨酸的?max＝280nm，(2)氨基酸兩性解離與等電點(diǎn)：氨基酸在結(jié)晶形態(tài)或在水溶液中，并不是以游離的羧基或氨基形式存在，而是離解成兩性離子。在兩性離子中，氨基是以質(zhì)子化(-NH3+)形式存在，羧基是以離解狀態(tài)(-COO-)存在。pH1pH11pH6在電場(chǎng)中，陽(yáng)離子向負(fù)極移動(dòng)；陰離子向正極移動(dòng)；調(diào)整pH，使aa凈電荷為零時(shí)，aa既不向陽(yáng)極也不向陰極移動(dòng)。規(guī)定aa凈電荷為為零時(shí)的pH為該aa的

5、等電點(diǎn)R-R+R±pI=?（pK1+pK2）K1=[R±][H+][R+]K2=[R+][R-][H+]等電點(diǎn)相當(dāng)于該aa兩性離子狀態(tài)兩側(cè)基團(tuán)pK值之和的一半。a、各種aa的pI不同；b、同一pH下，各種aa所帶電荷不同；pH＜pI：aa+在電場(chǎng)中向負(fù)極移動(dòng)pH＞pI：aa-在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)用離子交換、電泳將aa分開c、處于pI時(shí)，aa溶解度最小，易沉淀；可分離aa。（3）氨基酸的性質(zhì)（1）與茚三酮的反應(yīng)：α-氨基酸與水合茚三酮溶液共熱，引起aa氧化脫氨、脫羧，水合茚三酮與反應(yīng)產(chǎn)物（氨和還原型茚三酮）生成蘭紫色化合物（Pro和Hyp呈黃色），色深與溶液中氨基濃度成正

6、比。（2）與2,4-二硝基氟苯（DNFB）反應(yīng)鑒定多肽或蛋白質(zhì)的N-末端氨基酸（3）與異硫氰酸苯酯（PITC）的反應(yīng)用于N末端分析，又稱Edman降解法二、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)肽和肽鍵的結(jié)構(gòu)肽（peptide)：一個(gè)氨基酸的α-羧基和另一氨基酸的α-氨基脫水縮合而成的化合物。由兩個(gè)氨基酸組成的肽稱為二肽，由多個(gè)氨基酸組成的肽則稱為多肽。組成多肽的氨基酸單元稱為氨基酸殘基。通常在多肽鏈的一端含有一個(gè)游離的?-氨基，稱為氨基端或N-端；在另一端含有一個(gè)游離的?-羧基，稱為羧基端或C-端。多肽鏈共價(jià)主鏈為NCCNCCNCC的重復(fù)單位（一）蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)1、蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)(Pri

7、marystructure)即多肽鏈內(nèi)氨基酸殘基從N-末端到C-末端的排列順序，或稱氨基酸序列，是蛋白質(zhì)最基本的結(jié)構(gòu)。包括：(1)組成蛋白質(zhì)的多肽鏈數(shù)目.(2)多肽鏈的氨基酸順序，(3)多肽鏈內(nèi)或鏈間二硫鍵的數(shù)目和位置?！锲渲凶钪匾氖嵌嚯逆湹陌被犴樞?，它是蛋白質(zhì)生物功能的基礎(chǔ)。(2)測(cè)定步驟①多肽鏈的拆分（8mol/L尿素或6mol/L鹽酸胍處理，即可分開多肽鏈）.②測(cè)定蛋白質(zhì)分子中多肽鏈的數(shù)目。③二硫鍵的斷裂：（過甲酸）④測(cè)定每條多肽鏈的氨基酸組成⑤分析多肽鏈的N-末端和C-末端⑥多肽鏈斷裂成多個(gè)肽段⑦測(cè)定每個(gè)肽段的氨基酸順序⑧確定肽段在多肽鏈