全國病媒生物監(jiān)測實施方案 抗藥性0405

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1、附件8全國病媒生物監(jiān)測實施方案_抗藥性ChinaOperationalGuidelinesforVectorsSurveillance—InsecticideResistance通過抗藥性監(jiān)測工作的開展，能夠使我們了解病媒生物對常用殺蟲劑的抗藥性水平，掌握抗藥性的發(fā)展變化趨勢，合理選擇、使用有效殺蟲劑；通過抗藥性治理措施的落實，可以保護殺蟲劑的有效性，提高病媒生物的防控效果。1.監(jiān)測病媒生物種類蚊蟲（當?shù)貎?yōu)勢蚊種或重要媒介蚊種至少一種，一旦選定，就持續(xù)監(jiān)測）、家蠅和德國小蠊。2.監(jiān)測生境每個監(jiān)測

2、縣（區(qū)），選擇轄區(qū)內(nèi)不同方位的城市居民區(qū)、公園、醫(yī)院、城鄉(xiāng)結(jié)合部、農(nóng)村等生境采集蚊蟲、家蠅和德國小蠊，移入實驗室飼養(yǎng)，進行抗藥性測定。不同年度間抗藥性監(jiān)測試蟲采集點應(yīng)相對固定。3.監(jiān)測頻率和時間每類病媒生物至少每兩年開展一次抗藥性監(jiān)測。各類試蟲應(yīng)在其活動高峰期采集。4.待測殺蟲劑選擇當?shù)胤揽匚孟x、家蠅和德國小蠊的常用殺蟲劑不少于3種。監(jiān)測必須使用中國疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所統(tǒng)一標定的殺蟲劑原藥。5.監(jiān)測方法（1）蚊蟲抗藥性測定用WHO推薦使用的幼蟲浸漬法和成蚊接觸筒法（參考GB/T263

3、47-2010）分別測定幼蟲和成蚊的抗藥性。幼蟲測定3齡末至4齡初幼蟲對常用殺蟲劑的LC50。成蚊用診斷劑量測定其24ｈ死亡率。1）蚊蟲的采集和飼養(yǎng)在當?shù)赜写硇缘膮^(qū)域（如東、西、南、北、中不同方位，或者某一個特定區(qū)域），根據(jù)蚊蟲的吸血活動、棲息和孳生環(huán)境采集蚊蟲。按表8-1中列出的項目，記錄采集時間、地點、經(jīng)緯度、采集數(shù)量和蟲態(tài)等信息。試蟲采集后，根據(jù)蚊蟲的孳生習性、成蚊或4齡幼蟲形態(tài)學特征，鑒定種類，進行常規(guī)飼養(yǎng)。82）成蚊抗藥性測定把恢復(fù)筒與隔板連接，用吸蚊管取20～30只羽化后3～5天的

4、健康雌蚊（中華按蚊用采自野外的健康雌蚊）放入恢復(fù)筒中，平行放置15min，剔除不健康蚊蟲。在隔板另一面裝上已襯貼藥紙（可自制、購買，或由中國疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所提供）的接觸筒，使恢復(fù)筒在下面，豎直放置，輕輕拍打使蚊蟲聚集于恢復(fù)筒底部，然后瞬間把隔板抽開，顛倒接觸筒與恢復(fù)筒位置，將恢復(fù)筒內(nèi)蚊蟲輕吹入接觸筒，迅速關(guān)上隔板。將筒平放，即開始計算接觸時間。不同的殺蟲劑接觸時間參考表8-4。試蟲死亡的判斷標準：試蟲完全不動，或僅軀體、足、翅或觸角等震顫而無存活的可能性，視為死亡。若對照死亡率超

5、過20％，試驗視為無效，重新測定。測試結(jié)果記入表8-3。結(jié)果用死亡率表述：死亡率=（死亡蟲數(shù)/試蟲總數(shù)）×100%對照組死亡率小于5%無需校正，對照組死亡率在5%～20%之間，用Abbott公式進行校正。校正死亡率=（處理組死亡率-對照組死亡率）/(1-對照組死亡率)′100%抗性水平判斷標準：在診斷劑量下蚊蟲的死亡率在98%～100%表明其為敏感種群；死亡率在80%～98%（不含）表明其為可能抗性種群；死亡率<80%表明其為抗性種群。3)幼蟲浸漬法測定用丙酮配制殺蟲劑的5～7個系列濃度；將燒杯

6、中加入200mL脫氯水，用微量移液器取出100μL，首先在對照組燒杯加入100μL丙酮，再依次于試驗組中加入100μL藥液，用玻璃棒或磁力攪拌器，按照對照、低濃度、高濃度的次序攪拌均勻，每個濃度至少重復(fù)3次。用幼蟲吸管，吸取3齡末至4齡初幼蟲，用小漏勺將水濾掉，按照對照組、低濃度組到高濃度組依次分別加入20只幼蟲。放入設(shè)定好的溫度〔（25±1）℃〕和濕度〔（70±10）%〕的培養(yǎng)箱或房間中，24ｈ后查看蚊蟲的死亡情況。測定信息和結(jié)果記錄見表8-2，獲得毒力回歸線、致死中濃度、斜率值、卡方值等數(shù)據(jù)

7、，計算抗性倍數(shù)（RR）。RR=待測種群LC50值/敏感種群LC50值可參考如下標準判斷抗藥性水平：RR＜3為敏感，3≤RR＜10為低抗，10≤RR＜408為中抗，RR≥40為高抗。（2）家蠅抗藥性測定家蠅的抗藥性測定采用WHO推薦的點滴法（參考GB/T26347-2010）。1）采集和飼養(yǎng)用網(wǎng)捕或籠誘等方法，在代表性區(qū)域采集成蠅，也可以在養(yǎng)殖場挖取采集幼蟲(蛆)。從采集到的蠅類中挑選家蠅，在室內(nèi)按照常規(guī)方法飼養(yǎng)。2）殺蟲劑配制：用丙酮將殺蟲藥劑母液稀釋到一系列的濃度(通過預(yù)試驗確定藥劑的濃度范圍

8、,最低濃度時死亡率小于1O%,最高濃度時大于80%)。3）測定和恢復(fù)環(huán)境：溫度:(25±1)℃,光周期:14L:10D,相對濕度:(60-70)%。4）測定方法將試蟲用乙醚或C02等麻醉至昏迷。用點滴器將0.3μL左右殺蟲藥劑溶液點滴在雌性家蠅前胸背板上。每個處理組點滴30只羽化后3～5天的雌性家蠅,以相應(yīng)溶劑點滴為空白對照,試驗重復(fù)3次。將受藥后的試蟲轉(zhuǎn)入清潔容器內(nèi),供給水和食物,正常飼養(yǎng),24h后統(tǒng)計死亡情況，填入表8-2。凡腹部上翻、六足抽搐、用銳器觸之不能翻身爬行者判為死亡。根據(jù)每一濃度