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《實(shí)驗(yàn)六酶活性影響因素的測(cè)定-溫度、pH對(duì)酶活性的影響》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、酶實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)六酶活性影響因素的測(cè)定-溫度、pH對(duì)酶活性的影響基本原理酶是生物體內(nèi)具有催化功能的蛋白質(zhì),也叫生物催化劑。生物體內(nèi)存在多種多樣的酶,從而使生物體在溫和的條件下能夠迅速完成復(fù)雜的代謝過程。酶活力受環(huán)境PH值的影響極為顯著。通常各種酶只有在一定的PH值范圍內(nèi)才表現(xiàn)出活力。一種酶表現(xiàn)活力最高時(shí)的pH值,稱為該酶的最適pH。低于或高于最適pH時(shí),酶的活力均逐漸降低。不同酶的最適pH也不同。酶的最適pH也受底物性質(zhì)和緩沖液性質(zhì)的影響。酶的催化作用受溫度的影響亦很大。在一定溫度范圍內(nèi),隨著溫度的升高,酶的熱變性不顯著,而酶促反應(yīng)速度增加,直至達(dá)到最大值。反應(yīng)速度達(dá)到最大值時(shí)
2、的溫度稱為酶作用的最適溫度。當(dāng)溫度超過酶的最適溫度時(shí),酶促反應(yīng)急劇下降,直至完全停止。一種酶的最適溫度不是完全固定的,它與作用的時(shí)間長(zhǎng)短有關(guān),一般作用時(shí)間長(zhǎng),最適溫度低,而作用時(shí)間短,則最適溫度高。大多數(shù)動(dòng)物酶的最適溫度為37-40℃,植物酶的最適溫度為40-60℃。本實(shí)驗(yàn)分別以不同溫度及不同pH條件下讓淀粉酶作用于淀粉,并用碘液檢查酶促淀粉的水解程度,來說明溫度及pH對(duì)酶活力的影響。實(shí)驗(yàn)中以稀釋的唾液作為淀粉酶液。唾液內(nèi)的淀粉酶可將淀粉逐步水解成各種不同大小的糊精分子,最終產(chǎn)物為麥芽糖和少量的葡萄糖。它們遇碘呈不同的顏色。直鏈淀粉(即可溶性淀粉)遇碘呈藍(lán)色;糊精按分子從
3、大到小的順序,遇碘可呈藍(lán)色、紫色、暗褐色和紅色,最小的糊精和麥芽糖遇碘不顯顏色。由于在不同溫度,不同pH條件下唾液淀粉酶的活性高低不同,則淀粉被水解的程度不同,所以,可由酶反應(yīng)混合物遇碘所呈現(xiàn)的顏色來判斷上述諸因素對(duì)酶活性的影響。操作步驟2.溫度對(duì)酶活力的影響取3支試管,編號(hào)后各加入淀粉溶液2毫升。將第1,2號(hào)試管放入37℃恒溫水浴中保溫,第3號(hào)試管放入冰水中冷卻,5分鐘后,向第1號(hào)試管中加入煮沸5-15分鐘的稀釋唾液1毫升,向第2,3號(hào)試管加稀釋唾液各1毫升。搖勻,20分鐘后取出3支試管,各加碘化鉀-碘溶液2滴,混勻,比較各管溶液的顏色。判斷淀粉被唾液酶水解的程度,并說
4、明溫度對(duì)唾液酶活性的影響。1.稀釋的新鮮唾液:取唾液適量,量取一定體積,用蒸餾水稀釋20倍。3.pH值對(duì)酶活力的影響取8支10毫升刻度試管,編號(hào)。按下表中的比例,用取樣器添加0.2M磷酸氫二鈉溶液和0.1M檸檬酸溶液,制備PH5.0-8.0的8種緩沖溶液.錐形瓶號(hào)0.2M磷酸氫二鈉(毫升)0.1M檸檬酸(毫升)緩沖液PH123456785.155.806.316.927.728.699.369.724.854.203.693.082.281.310.640.285.05.66.06.46.87.27.68.0取9支干燥的試管,編號(hào).將8支刻度試管中不同pH的緩沖液各取3毫
5、升,分別加入相應(yīng)的號(hào)碼(1-8號(hào))的試管中.然后,再向每個(gè)試管中添加0.5%淀粉溶液2毫升.第9號(hào)試管與第5號(hào)試管的內(nèi)容物相同.向第9號(hào)試管中加入50-100倍的唾液2毫升,搖勻后放入37℃恒溫水浴中保溫.每隔1分鐘由第9號(hào)試管中取出1滴混合液,置于白瓷板上,加1滴碘化鉀-碘溶液,檢驗(yàn)淀粉的水解程度,待結(jié)果呈橙黃色時(shí),取出試管,記錄保溫時(shí)間.注意:掌握第9號(hào)試管的水解程度是本實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵之一.以1分鐘的間隔,依次向第1至第8號(hào)試管中加入稀釋100倍的唾液2毫升,搖勻,并以1分鐘的間隔依次將8支試管放入37℃恒溫水浴中保溫.然后,按照第9號(hào)試管的保溫時(shí)間,依次將各管迅速取
6、出,并立即加入碘化鉀-碘溶液2滴,充分搖勻.觀察各管呈現(xiàn)的顏色,判斷在不同pH值下淀粉被水解的程度,可以看出PH對(duì)唾液淀粉酶活性的影響,并確定其最適pH.思考題:將乳清蛋白、淀粉、胃蛋白酶、唾液淀粉酶和適量水混合裝入一個(gè)容器內(nèi),調(diào)整pH至2.0,保存于37℃的水溶鍋中,過一段時(shí)間后,容器內(nèi)剩余的物質(zhì)是什么?為什么?下次實(shí)驗(yàn)氨基酸紙電泳分離技術(shù)及檢測(cè)分析