愈傷組織的誘導(dǎo)和培養(yǎng).doc

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1、愈傷組織的誘導(dǎo)和培養(yǎng)班級：植物092姓名：徐煒佳學(xué)號:0901080223一、實(shí)驗冃的及意義二、實(shí)驗原理植物組織與細(xì)胞培養(yǎng)是應(yīng)用無菌操作的方法培養(yǎng)離體的植物器官、組織或細(xì)胞的過程。如果組織培養(yǎng)使用的植物材料是帶菌的，在接種前就必須選擇適當(dāng)?shù)南緞χ参锿庵搀w進(jìn)行表面消毒，獲得無菌材料進(jìn)行組織培養(yǎng)，這是取得植物組織培養(yǎng)，成功的基本前提和重耍保證。由于植物細(xì)胞具冇全能性，外植體在合適的培養(yǎng)基上通過脫分化，形成一種能迅速增殖的無特定結(jié)構(gòu)和功能的細(xì)胞團(tuán)——愈傷組織（callus）o植物生長調(diào)節(jié)劑如2,4■二氯苯氧乙酸（2,4?D）等

2、是誘導(dǎo)外植體形成遇上組織的重要因素。三、實(shí)驗儀器與藥品超凈工作臺，酒精燈，銀子，剪刀，解剖刀，75%乙醇，酒精消毒棉材料：煙草無菌苗，甘薯無菌苗四、實(shí)驗步驟1.按下表分別配制培養(yǎng)基將配置的四種培養(yǎng)基分別分裝入20個培養(yǎng)瓶，高溫滅菌后水平放置凝固2.接種前，將實(shí)驗所需器具放入超凈工作臺，打開紫外燈滅菌20-30min,關(guān)閉紫外燈，開啟通風(fēng)開關(guān)。洗手后用酒精噴灑消毒手、手臂、實(shí)驗材料及培養(yǎng)基外部等進(jìn)入超凈工作臺的部分。進(jìn)入超凈工作臺，用酒精棉擦拭臺面（手勿伸出工作臺），臺面完全風(fēng)干后點(diǎn)燃酒精燈。1.接種開始時，將銀子及手術(shù)刀在酒

3、精中浸泡，并在酒精燈外焰上燒熾片刻，充分冷卻。取幼嫩的煙草（甘薯）葉片，用手術(shù)刀切割成小片,再用銀子將其接種至相應(yīng)的培養(yǎng)基上，每瓶接種3~5片，封口后取岀超凈工作臺，標(biāo)注姓名、日期、培養(yǎng)基和接種材料。4.將上述培養(yǎng)材料常溫暗培養(yǎng)，每隔7天觀察一次，并記錄培養(yǎng)情況五、實(shí)驗結(jié)果組織長芽，而當(dāng)生長素含量大于細(xì)胞分裂素含量吋，二者共同作用在室溫下可誘導(dǎo)外植體生成不定根，也可形成愈傷組織，細(xì)胞色素沉淀情況嚴(yán)重；NAA為植物生長素，6-BA為細(xì)胞分裂素，促進(jìn)抒插生根，而當(dāng)細(xì)胞分裂素含量大于生長素含量時，二者共同作用在室溫下可誘導(dǎo)外植體生

4、成不定芽，此次實(shí)驗由于溫度非形成愈傷組織的最適溫度，所以未形成完整的愈傷組織細(xì)胞團(tuán)。七、思考題?誘導(dǎo)率（2,4?D）=100%誘導(dǎo)率（NAA）=100%?除去植物表面菌類，同時不破壞植物的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)?防止消毒液在外植體表面殘留，對外植體造成損傷?在超凈工作臺上操作，工作臺在使用前要紫外消毒，酒精消毒等應(yīng)在酒精燈火焰前操作取外植體前酒精浸泡并灼燒鍛子和手術(shù)刀銀子和手術(shù)刀稍事冷卻再取外植體，以免燒死細(xì)胞接種后應(yīng)盡快封上鋁箔?實(shí)驗前消毒不徹底實(shí)驗屮操作不規(guī)范?外植體本身產(chǎn)生愈傷組織的潛在能力基木培養(yǎng)基對外植體的影響激素組合是最重要

5、的影響因素