單克隆抗體論文

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1、此技術(shù)是1975年Kohlor應(yīng)用細胞雜交瘤技術(shù)，將致敏的淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，形成雜交瘤，而產(chǎn)生同源抗體，因為此雜交瘤細胞既保持了瘤細胞增生的特性，又保持了分泌抗體的特性，能產(chǎn)生無限量的同源單克隆抗體。這些抗體有相同的結(jié)構(gòu)和較為均一的理化性質(zhì)，能對抗原大分子的決定簇有較高的分辨能力，特異性強，所以稱之為生物激光?！瘑慰寺】贵w除有很強韻特異性外，監(jiān)可做為裁體；(1)可與毒素聯(lián)接，如白喉類毒素，相思豆毒素與單克隆抗體聯(lián)接制成抗體毒索聯(lián)接物。上海細胞研究所研制有Meab一毒素聯(lián)接物治療肝癌取得初步療效。(2)可與藥物交聯(lián)

2、，北京抗生索研究所將單克隆抗體與爭光霉素結(jié)合成Meab一藥物聯(lián)接物，比單純藥物治療增效12倍．(3)與脂質(zhì)體聯(lián)接，形成Meab～脂質(zhì)體聯(lián)接物，可以運載大量抗癌藥分子集中在9中瘸部位。通過脂質(zhì)體易于將藥物進入腫瘤細胞，內(nèi)技揮療效。(4)Me曲與免疫調(diào)節(jié)劑聯(lián)接。有報導(dǎo)干擾素與抗人成骨癌Me如連接可在體內(nèi)增強自然殺傷細胞活性。所以單克隆抗體可做為生物導(dǎo)彈發(fā)揮更大的療效。作用機理：多數(shù)認(rèn)為是一種依賴抗體的細胞毒作用(ADC,G)]．效應(yīng)細胞可能是表面攜帶Fc受體的單核或巨噬細胞。單克隆抗體殺傷腫瘤效應(yīng)與其免疫球蛋自的亞群有關(guān)(因

3、效應(yīng)細胞具有較多的Fc受體。)與親和力無關(guān)．但與靶細胞所表達韻結(jié)合點的數(shù)目有關(guān)。1"-干擾索由于能增加效應(yīng)細胞Fc受體及促進腫瘤抗原表達之能力，所以能增強殺傷效應(yīng)。同時單克隆抗體對腫瘤的殺傷效應(yīng)取決于效應(yīng)細胞(單核或巨唑細胞)與腫瘤細胞之比觀因此在腫瘤負(fù)荷較小時應(yīng)用為好。、具體作用為通過融合形成雜交瘤分泌單克隆抗體，識別癌細胞上的盹瘤特異抗原，發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，殺傷癌細胞。和更進一步將藥物，毒素，脂質(zhì)體交聯(lián)到單克隆抗體上，可以增強對癌細胞的殺傷能力。1獲得抗體的傳統(tǒng)方法及其缺點傳統(tǒng)的抗體生產(chǎn)方法是向動物(如馬、羊等)體內(nèi)

4、反復(fù)注射某種抗原，即通過反復(fù)感染動物，使動物產(chǎn)生抗體，然后從動物血清中分離所需抗體。如此得來的抗體產(chǎn)量低、純度低，且制備的抗體特異性差，難免含有除所需抗體以外的多種其他抗體。2單克隆抗體的制備原理哺乳動物感染病原體(如病毒、細菌等)后，體內(nèi)會形成相應(yīng)的B淋巴細胞。B淋巴細胞能分泌抗體(這里的B淋巴細胞應(yīng)理解為效應(yīng)B細胞，即漿細胞)，凝聚或殺死這些病原體。動物在免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類多達百萬種以上，但每一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體(一個B淋巴細胞只能針對一種抗原決定簇產(chǎn)生一種特異性的抗體)。因此，

5、要想獲得大量的單一抗體，必須克隆單一的B淋巴細胞，形成細胞群。B淋巴細胞具有產(chǎn)生單一抗體的能力，但不能在體外增殖(在體外培養(yǎng)條件下會很快死亡);骨髓瘤細胞是一種癌細胞，它能在體外培養(yǎng)條件下無限增殖，但不能產(chǎn)生抗體。因此，把一種B淋巴細胞與骨髓瘤細胞進行細胞融合，產(chǎn)生雜交瘤細胞，它會兼有兩個親本細胞的特性—既能在體外培養(yǎng)條件下不斷增殖，又能產(chǎn)生出某種特異性的抗體3單克隆抗體的制備過程3.IB淋巴細胞及骨髓瘤細胞的獲得給小鼠注射特定的抗原(如羊的紅細胞)，使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)，從產(chǎn)生免疫反應(yīng)小鼠的脾臟細胞中得到了抗羊紅細胞的抗

6、體，這說明在小鼠的脾臟細胞中形成了相應(yīng)的B淋巴細胞。然后從免疫小鼠的脾臟中分離出B淋巴細胞。這里應(yīng)明確，脾臟是人和動物體內(nèi)最大的淋巴器官，是免疫細胞生成、成熟或集中分布的場所。提取并培養(yǎng)小鼠的骨髓瘤細胞獲得大量的骨髓瘤細胞。3.ZB淋巴細胞與骨髓瘤細胞的融合用滅活的病毒或聚乙二醇、電激等誘導(dǎo)小鼠的骨髓瘤細胞與脾臟中產(chǎn)生的B淋巴細胞融合，結(jié)果得到3種類型的細胞:未融合的親本細胞、融合的具有同種核的細胞、融合的雜交細胞。3.3雜交細胞的篩選在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng)上述類型的細胞，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都

7、會死亡，只有融合的雜交細胞才能生長。該雜交細胞的特點是既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一的抗體。3.4雜交瘤細胞的抗體檢測及克隆化培養(yǎng)融合后的細胞經(jīng)選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細胞就是雜交瘤細胞。但這些雜交瘤細胞并非都是能分泌所需抗體的細胞，通常用“有限稀釋法”來進行再一次篩選。將雜交瘤細胞稀釋，用多孔細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細胞不超過一個，通過培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測各孔上清液中細胞分泌的抗體(常用酶聯(lián)免疫吸附試驗法)，那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。陽性孔中的細胞還不能保證是來自單個細胞，挑選陽性孔的細胞繼續(xù)進行有

8、限稀釋，一般需進行3次一4次，直至確信每個孔中增殖的細胞為單克隆細胞。該過程即為雜交瘤細胞的克隆化培養(yǎng)。這樣，經(jīng)過多次篩選，就可獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的細胞。3.5利用雜交瘤細胞生產(chǎn)抗體的方法將雜交瘤細胞(即上述專一抗體檢驗陽性的單克隆細胞)在體外條件下大規(guī)模培養(yǎng)，或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖，這樣，從細胞培養(yǎng)液或小