資源描述：
《卡拉膠降解菌的篩選》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、卡拉膠降解菌的篩選摘要：利用梯度稀釋平板涂布的方法將經(jīng)過富集的卡拉膠降解菌樣品在涂布于平板上，以卡拉膠為唯一碳源，在適宜的環(huán)境下培養(yǎng)，得到單個菌落，達到卡拉膠降解菌的初步篩選的目的。關(guān)鍵字：卡拉膠降解菌、初篩前言：卡拉膠(Carrageenan)又名角叉菜膠、鹿角藻膠，是從紅藻中提取的一種高分子親水性多糖。根據(jù)其乳糖殘基上硫酸酯基團的不同，可分為K一型、c-型、A一型、弘一型等7種最小重復結(jié)構(gòu)單位。A一卡拉膠是一種高硫酸酯化的天然多糖資源，其降解產(chǎn)物A一卡拉膠寡糖的活性研究已得到充分的開展，如抗凝
2、血、抗病毒、抗腫瘤等[1]。國內(nèi)外的研究者從提取、結(jié)構(gòu)、活性等方面對卡拉膠進行了研究[2]。而不同的卡拉膠具有不同的凝固性和表面活性，可用于凝固劑黏合劑、穩(wěn)定劑、乳化劑、懸浮劑等，廣泛用于食品工業(yè)。[3]正文：一．器材：試管16支，玻璃涂棒一根，1ml移液管3支，酒精燈一個，培養(yǎng)皿24個，試管架，1個錐形瓶，烘箱，高壓殺菌鍋二．試劑：K2HPO4·3H2O，MgSO4·7H2O,FePO4·4H2O,CaCl2,H2O，NaNO3,NaCl卡拉膠，海水三．步驟：1.卡拉膠降解菌的初篩：（1）無機鹽
3、母液配制：K2HPO4·3H2O:2.2g,MgSO4·7H2O:1.25g,FePO4·4H2O:0.025g,CaCl2:0.25g然后溶于水中，共配制250ml;[4]（2）培養(yǎng)基溶液配：NaNO3：0.7g,NaCl：5.25g，卡拉膠：4.2g，溶于海水中，共配制350ml，并添加無機鹽母液：35ml[5]（3）預處理殺菌：取12支試管，用移液管分別向各試管中加入9ml海水，用報紙包好；同時用報紙將24個培養(yǎng)皿﹑3個1ml移液管﹑裝培養(yǎng)基液的錐形瓶﹑分別包好。然后將培養(yǎng)皿﹑移液管放入烘箱
4、，殺菌2h；將錐形瓶﹑試管放入高壓殺菌鍋在120攝氏度殺菌30min.（4）倒制培養(yǎng)基：分別將大約15ml的培養(yǎng)基溶液倒入殺菌后的培養(yǎng)皿中。冷卻，制成培養(yǎng)基。（5）樣品稀釋：用1ml的無菌移液管分別從原有6個樣液中吸取1ml樣液注入盛有9ml無菌海水的試管中，震蕩混勻即為濃度為10-1，然后再用同一支1ml無菌移液管，從此管中吸取1ml注入另一盛有9ml無菌海水的試管中即為濃度為10-2。[6]（6）涂布：在無菌環(huán)境下，先用1ml的無菌移液管從稀釋度10-2的稀釋液中吸取0.2ml菌液，涂布于一些
5、好標號的培養(yǎng)基平板內(nèi)，然后吸取10-1的稀釋液0.2ml涂布已寫好稀釋度的培養(yǎng)基平板上，室溫下靜置。注意：移液管不可混用，始終對號實用。（7）培養(yǎng)：將涂布好的培養(yǎng)基平板倒置于室溫中，培養(yǎng)48h.2.卡拉膠降解菌的富集:用1ml的無菌移液管分別從含有純原液的三個三角燒瓶中吸取0.2ml放入已標號并且加好所需培養(yǎng)液的試管中進行富集。與平板一起在適宜的環(huán)境下培養(yǎng)48小時。四．分析與討論：1：觀察卡拉膠降解菌的培養(yǎng)情況，可以觀察到較清晰的菌落，分別有小粉色斑點狀菌落，乳白色菌落，較大的淡藍色菌落，透明狀菌
6、落，深坑狀菌落。2：觀察試管中卡拉膠降解菌的富集情況對試管富集情況進行排序。排序結(jié)果：A2，B1,A1,B2,C2,C1本實驗中降解菌生長繁殖較好，出現(xiàn)了很明顯的菌落，但是并不是單一的菌落，進一步的分離純化還需要在此進行復篩。參考文獻：[1]周革非，魏元臣，孔娜娜等.λ卡拉膠降解組分的分離純化、抗氧化及免疫活性研究.海洋科學,2009年,第33卷,第8期[2]胡國華．功能性食品膠．化學工業(yè)出版社，2003．[3]楊玉玲,周光宏.卡拉膠凝膠質(zhì)構(gòu)特性的研究.食品工業(yè)科技.2008[4]牟海津,江路，蔣
7、萱等．卡拉膠降解菌M-2的篩選與產(chǎn)酶性質(zhì)[J]．中國水產(chǎn)科學，2002，9(3)：251—254，202．[5]段高飛,蘇貝，韓峰等.海洋細菌QY202產(chǎn)κ-卡拉膠酶的分離純化和性質(zhì)研究.中國海洋大學學報（自然科學版）.2010，40(3)[6]大連海洋大學編.食品微生物學實驗指導書.2009：17實習日記6月20日卡拉膠降解菌篩選實驗的資料查詢與搜集1，主要內(nèi)容：本組實驗主要內(nèi)容為就上一班同學富集的菌類利用梯度稀釋，平板涂布的方法進行初篩，初篩出卡拉膠降解菌。2：查找參考文獻3：確定實驗方案4：
8、列出實驗所需器材和試劑5：了解實驗的操作過程及注意事項6月21日進行卡拉膠降解菌的初篩與富集實驗：一，初篩：器材：試管16支，玻璃涂布棒，移液管1ml三根10ml一根，酒精燈倆個，培養(yǎng)皿24個，試管架一個，三個錐形瓶，鑰匙，記號筆，烘箱，高壓殺菌鍋，試劑：K2HPO4·3H2O，MgSO4·7H2O,FePO4·4H2O,CaCl2,H2O，NaNO3,NaCl卡拉膠，海水步驟：1:無機鹽母液配制：K2HPO4·3H2O:2.2g,MgSO4·7H2O:1.25g,FePO4·4H
