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《人羊膜勻漿上清液治療兔角膜堿燒傷的病理研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、人羊膜勻漿上清液治療兔角膜堿燒傷的病理研究【摘要】目的:觀察人羊膜勻漿上清液促進(jìn)兔角膜堿燒傷后角膜上皮和基質(zhì)修復(fù)的作用，為臨床上應(yīng)用人羊膜勻漿上清液點(diǎn)眼治療眼堿燒傷提供理論依據(jù)｡方法:將制備的羊膜勻漿上清液點(diǎn)眼治療兔角膜堿燒傷，并對(duì)治療后的角膜照相觀察角膜上皮愈合和基質(zhì)修復(fù)情況｡結(jié)果:羊膜勻漿上清液治療角膜堿燒傷后眼充血明顯減輕，角膜上皮愈合較快，角膜上皮細(xì)胞排列整齊,基質(zhì)屮炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減輕凡膠原纖維排列整齊｡結(jié)論:早期應(yīng)用羊膜勻漿上清液能促進(jìn)兔角膜堿燒傷后角
2、膜的愈合及膜基質(zhì)有序修復(fù)｡【關(guān)鍵詞】羊膜勻漿上清液;角膜;堿燒傷文獻(xiàn)報(bào)道羊膜上皮細(xì)胞分泌EGF､TGF?a､KGF､HGF､bFGF等生長(zhǎng)I大I子[1,2],我們直接將羊膜制成勻漿，觀察其存在的多種細(xì)胞因子是否對(duì)角膜上皮細(xì)胞的增殖有促進(jìn)作用，并將羊膜勻漿上清液制成眼液點(diǎn)眼治療兔角膜堿燒傷，然后行角膜病理研究，觀察其對(duì)角膜上皮愈合､炎癥反應(yīng)､基質(zhì)修復(fù)的影響,以期尋找一種比羊膜移植經(jīng)濟(jì)､方便&#
3、65380;效果住的治療角膜堿燒傷的新方法｡1資料和方法1.1動(dòng)物及主要試劑:⑴家兔:體重1.5?2.0kg｡⑵羊膜勻漿上清液:口制，方法如下:在超凈臺(tái)上將羊膜在PBS液中清洗3次，約10?15分鐘，取適當(dāng)大小稱濕重，按1：1加PBS液放入勻漿機(jī)中,每分鐘5000轉(zhuǎn),10沖程磨制勻漿，每沖程30秒｡取出勻漿按1：5加PBS液于離心管中離心2000r/min,10分鐘,取上清液備用(1小時(shí)內(nèi)用)｡后加入細(xì)胞凍存液放入?80°C冰箱過(guò)夜，再放入液氮中
4、凍存｡(3)bFGF(貝復(fù)舒眼液);(4)1mol/LNaOH:口制｡1.2堿燒傷動(dòng)物模型的制備:(1)1%T卡因眼液點(diǎn)眼3次｡(2)乙酉迷吸入麻醉｡(3)開(kāi)瞼器開(kāi)瞼,將浸在1mol/LNaOH的直徑為8mm的濾紙片置于兔角膜中央30秒｡(4)生理鹽水沖洗結(jié)膜囊3分鐘｡1.3動(dòng)物分組和點(diǎn)眼:取15只家兔(30只眼)分為3組:對(duì)照組､羊膜勻漿組､bFGF組｡堿燒傷后立即開(kāi)始點(diǎn)眼，
5、羊膜勻漿組(1:2羊膜勻漿上清液加氯霉素眼液點(diǎn)眼)､bFGF組(貝復(fù)舒眼液加氯霉素眼液點(diǎn)眼)､對(duì)照組(生理鹽水加氯霉索眼液點(diǎn)眼)｡每天每眼點(diǎn)眼3次，羊膜勻漿液每天從液氮中取出新鮮配制｡1.4角膜取材送檢:術(shù)后第一天､第三天､第七天和第十四天分別每組取材行光鏡病理檢查｡1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所冇數(shù)據(jù)均用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差（x土s）表示，采用SPSS10.0軟件包行方弟分析｡2結(jié)果2.1HE染色:堿燒傷后
6、第一天､第三天見(jiàn)bFGF組和對(duì)照組白細(xì)胞均明顯多于羊膜勻漿組，第七天吋各組角膜上皮均已基本愈合,羊膜勻漿組和bFGF組見(jiàn)角膜上皮細(xì)胞排列整齊，而對(duì)照組角膜上皮細(xì)胞排列紊亂｡2.2VG染色:堿燒傷后第一天､第三天各組膠原纖維均較少，笫七天和第I?四天吋,羊膜勻漿組和bFGF組膠原纖維較多，排列較規(guī)則，而對(duì)照組排列相對(duì)紊亂｡2.3AgNOS染色成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù):對(duì)染色切片行成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù)（每張切片隨機(jī)選3個(gè)視野,xl000）,每組3張切片，取其平均數(shù)行
7、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，見(jiàn)表1｡表1AgNOS染色成纖維細(xì)胞計(jì)數(shù)（個(gè)/視野丘占）組別第七天第十四天對(duì)照組4.77±1.7110.44±2.83羊炭勻漿組9?88±3?35?13.50±3.46bFGF組10?1±2.52“l(fā)l.88t3.48注:?與對(duì)照組比較,P<0.05嚴(yán)與對(duì)照組比較.P<0.0l3討論眼角結(jié)膜堿燒傷是臨床上嚴(yán)重而難治的眼表疾病之一,預(yù)后常常較差｡近年來(lái)羊膜移植治療角膜堿燒傷在臨床上已得到廣大眼科醫(yī)師的青睞ʍ力;但是對(duì)于羊膜移植后的轉(zhuǎn)歸，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為它是一種
8、暫吋性的生物覆蓋物,在移植后1?2周,羊膜口行溶解､脫落，或較長(zhǎng)久貼附于角膜表面，沉積于前彈力層為輕度霧狀混濁，持續(xù)3個(gè)月Z久,但移植后的羊膜長(zhǎng)期存在并成為受體組織組成部分尚缺乏直接證據(jù)｡在羊膜移植中羊膜的主要作用是給角膜上皮愈合提供健康基底膜作用｡但是進(jìn)一步研究表明，羊膜自身可表達(dá)EGF､TGF-?琢､KGF､HGF､bFGF､TGF■卩1&
