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1、兔角膜堿燒傷后LYVE：劉彥紅高莉莉鄭利民【摘要】目的：研究探討新西蘭大白兔角膜堿燒傷后LYVE-1(淋巴管內(nèi)皮透明質(zhì)酸鹽受體1)的表達及意義，進一步證實角膜新生淋巴管的存在，揭示其與角膜堿燒傷損傷修復的關(guān)系。方法：飼養(yǎng)24只健康新西蘭大白兔，左眼制作角膜堿燒傷模型作為實驗組，右眼不做手術(shù)作為對照組。術(shù)后1天、3天、7天、14天分別處死6只兔，免疫組化測定兩眼LYVE-1的表達情況。結(jié)果：實驗組于術(shù)后第3天出現(xiàn)表達，第7天、第14天表達增加；實驗組術(shù)后3天、7天和14天LYVE-1表達均高于對照組。結(jié)論：角膜新生淋巴管在角膜堿燒傷中扮演重要角色。【關(guān)鍵詞】角
2、膜堿燒傷；新生淋巴管；LYVE-1 AbstractObjective:ToexaminetheexpressionofLYVE-1inthecorneaofNetheonsetofcornealneolymphangiogenesisasentalgroup,lyinedthroughimmunohistochemistrymethod.Result:LYVE-1expressionintheexperimentalgroupexhibitsprogressiveincreasestartingfromthethirddayafteroperationa
3、ndreachesitspeakpresumablyaroundthe7thdayafteroperation.LYVE-1expressionintheexperimentalgroupexhibitsmuchhigherlevelthanthecontrolgroupateachtimepoint(t=3day,7dayand14day)examined.Conclusion:Cornealneolymphangiogenesisplaysanimportantroleinpost-burncornealrestoration. Keyphangiog
4、enesis;LYVE-1 角膜堿燒傷是臨床上復雜而難以治愈的眼病之一,堿性物質(zhì)既溶于水又溶于脂肪，因而進入細胞后，能迅速與細胞結(jié)構(gòu)中的脂類發(fā)生皂化反應(yīng)，故極易滲入眼組織深層，破壞眼內(nèi)組織。本實驗建立兔角膜堿燒傷的模型,通過免疫組化測定淋巴管內(nèi)皮透明質(zhì)酸鹽受體1（LYVE-1)的表達，為進一步證實角膜堿燒傷后角膜新生淋巴管的存在提供有力的證據(jù)?！ ?材料與方法 1.1動物及分組選擇內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學動物中心提供的3～4月齡健康新西蘭大白兔24只，體重2～3kg，復合飼料喂養(yǎng)。將24只新西蘭大白兔分為兩組：左眼制作角膜堿燒傷模型作為實驗組，右眼不做手術(shù)作為對照
5、組 1.2動物模型的制備角膜堿燒傷模型的制作：用5mm圓形濾紙在1N的NaOH溶液中充分浸透，取出濾紙吸取溶液，貼于角膜中央燒灼30秒，移去濾紙后立即用無菌生理鹽水沖洗結(jié)膜囊，以0.25%氯霉素滴眼。依Hughes分度法為中度堿燒傷模型?！ ?.3免疫組化檢查將實驗組及對照組術(shù)后1天、3天、7天、14天各組分別取6只兔的術(shù)眼及空白眼1/3膜（邊緣帶鞏膜組織），浸入10%中性甲醛固定液中固定24小時，酒精梯度脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，免疫組化測定LYVE-1值，陽性結(jié)果呈棕黃色背景無色或者淡黃色?！ ?.4統(tǒng)計學方法實驗數(shù)據(jù)用x±s表示，使用SPSS13.
6、0統(tǒng)計軟件包，采用方差分析，α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義?！ φ战M兔的角膜幾乎無明顯的LYVE-1表達。實驗組LYVE-1于術(shù)后第3天出現(xiàn)表達，第7天、第14天表達呈遞增趨勢，實驗組內(nèi)1天、3天、7天比較，LYVE-1值差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），7天和14天比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；實驗組3天、7天、14天LYVE-1表達均顯著高于相對應(yīng)的對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）?！ ?討論 眼部堿燒傷時，堿性物質(zhì)進入眼內(nèi)可與角膜蛋白結(jié)合形成堿化變性蛋白[1]。正常角膜中無血管及淋巴管,以維持角膜的透明性和相對免疫赦免
7、狀態(tài)。但在角膜受到化學傷、熱燒傷、感染、手術(shù)和佩戴角膜接觸鏡后,角膜緣的血管就可能長入角膜從而發(fā)生血管化，有關(guān)角膜新生血管在實驗和臨床研究均已得到證實，而關(guān)于角膜新生淋巴管(corneallymphangiogenesis,CL)的研究由于一直缺乏特異性淋巴管標記物而未能得到開展。早在半個世紀前，Collin[2]在兔的V實驗?zāi)Ｐ椭?，通過將墨汁注入到血管化角膜中而其最終流入眼局部淋巴結(jié)的實驗和超微結(jié)構(gòu)分析證明血管化角膜中存在新生淋巴管（corneallymphangiogenesis,CL）。角膜新生淋巴管可以加速角膜的抗原運輸和提呈[3],從而加快免疫應(yīng)答
8、的進程。LYVE-1是目前特異性最強的淋巴管內(nèi)皮標志
