循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)及臨床應(yīng)用

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1、中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)２０１５年７月第１９卷第７期—１２２３—文章編號(hào)：１００７－４２８７（２０１５）０７－１２２３－０５循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)及臨床應(yīng)用曹雅楠，莊文芳，盛慧明*（上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬同仁醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海２００３３６）循環(huán)腫瘤細(xì)胞（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ，ＣＴＣ）計(jì)數(shù)有助于過免疫磁性標(biāo)記的微球來捕獲靶細(xì)胞。ＥｐＣＡＭ是腫瘤相關(guān)早期診斷腫瘤轉(zhuǎn)移，反映患者的治療效果及腫瘤預(yù)后。近年鈣傳導(dǎo)信號(hào)１（ＣＤ３２６），屬于參與細(xì)胞間粘附的細(xì)胞表面分來循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)的廣泛應(yīng)用大力推進(jìn)了相關(guān)技術(shù)的發(fā)子，在多數(shù)上皮腫瘤細(xì)胞高表達(dá)。磁性微球連接ＥｐＣＡＭ可展。本文對(duì)近年

2、來外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，臨富集上皮來源的ＣＴＣ，此方法在進(jìn)行高劑量化療的乳腺癌患床及研究領(lǐng)域的應(yīng)用情況及未來展望做一簡(jiǎn)要綜述。者中陽(yáng)性選擇率較高［５］。循環(huán)腫瘤細(xì)胞（ＣＴＣ）一經(jīng)發(fā)現(xiàn)，就得到了廣泛重視，１．３形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)和免疫學(xué)基礎(chǔ)相結(jié)合的富集ＣＴＣ被認(rèn)為是腫瘤播散轉(zhuǎn)移的標(biāo)志。研究表明，腫瘤組織每還有兼顧上述兩種原理的結(jié)合性富集方法，如Ｒｏ-天會(huì)釋放大量腫瘤細(xì)胞入血，但在循環(huán)中的存活率極低，大ｓｅｔｔｅｓｅｐ-ａｐｐｌｉｅｄｉｍａｇｉｎｇｒａｒｅｅｖｅｎｔ（ＲＡＲＥ），該方法結(jié)合了多會(huì)發(fā)生凋亡，只有少量具有強(qiáng)侵襲力的腫瘤細(xì)胞可表達(dá)凋密度梯度分離和抗體介導(dǎo)分離兩個(gè)步驟

3、。首先在陰性分選亡抑制因子得以存活［１］，這些存活下來的腫瘤細(xì)胞即ＣＴＣ。過程中，ＣＤ４５陽(yáng)性細(xì)胞與多種紅細(xì)胞交聯(lián)結(jié)合形成雙特異６７個(gè)白細(xì)胞中僅含性四聚抗體復(fù)合物，再利用密度梯度離心法將這些復(fù)合物去ＣＴＣ在外周血中含量極少，一般每１０-１０有１個(gè)。所以，ＣＴＣ檢測(cè)首先要進(jìn)行細(xì)胞富集，以提高檢測(cè)除，ＣＤ４５陰性的單核細(xì)胞即可得以分離［６］。靈敏度，再對(duì)富集的細(xì)胞進(jìn)行ＣＴＣ檢測(cè)。２ＣＴＣ檢測(cè)技術(shù)１ＣＴＣ富集技術(shù)２．１細(xì)胞計(jì)數(shù)法１．１以形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)的富集最早應(yīng)用于檢測(cè)外周血ＣＴＣ的方法，基于細(xì)胞膜表面ＣＴＣ細(xì)胞體積大，直徑超過２５μｍ，胞核形狀不規(guī)則，核的特異分子標(biāo)志物來分離和計(jì)數(shù)

4、ＣＴＣ。較核酸分離方法，其漿比異常。腫瘤細(xì)胞體積分離法和核孔分析技術(shù)通過濾網(wǎng)優(yōu)點(diǎn)在于細(xì)胞未被破壞，保持完整，可在形態(tài)學(xué)上鑒別惡性可將直徑大于８μｍ的腫瘤細(xì)胞分離，但此類方法敏感性較表型和在單個(gè)細(xì)胞水平進(jìn)行分子特性分析。免疫細(xì)胞化學(xué)低［２］?；诿芏忍荻确蛛x原則的Ｏｎｃｏｑｕｉｃｋ，利用單個(gè)核細(xì)法（ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＩＣＣ）是指以顯色劑標(biāo)記的特異性胞較其它血液成分相比密度低，采用１．０７７ｇ／ｍｌ的密度梯抗體在組織細(xì)胞原位通過抗原抗體反應(yīng)和細(xì)胞化學(xué)呈色反度將單個(gè)核細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞與血液其它成分分離，同時(shí)增加應(yīng)，對(duì)相應(yīng)抗原進(jìn)行定位、定性和定量的技術(shù)。但此方法敏

5、設(shè)置多孔屏障，進(jìn)而分離得到更加純化的目的細(xì)胞［３］。感性低、檢測(cè)繁瑣、易誤診。目前較常用的細(xì)胞角蛋白（Ｃｙ-１．２以免疫學(xué)為基礎(chǔ)的富集ｔｏｋｅｒａｔｉｎ，ＣＫ）抗體能與巨噬細(xì)胞、漿細(xì)胞及有核造血細(xì)胞前免疫磁珠法將磁性微珠包被單抗形成免疫磁珠，再結(jié)合體特異或非特異結(jié)合［７］，ＭＵＣ-１可與紅系祖細(xì)胞結(jié)合。使靶細(xì)胞上的對(duì)應(yīng)抗原形成抗原-抗體-磁珠復(fù)合物，在外加磁用ＣＤ４５的對(duì)比染色使得這種情況有所改善。在乳腺癌中，場(chǎng)作用下定向移動(dòng)、吸附，進(jìn)而與其它細(xì)胞分離。該分離技常使用已有的乳腺癌特異性抗體進(jìn)行ＣＴＣ篩選，如ＨＥＲ２、術(shù)的方法有兩種：（１）陽(yáng)性分離法是直接從細(xì)胞混合液中分抗乳球

6、蛋白等，但并非所有乳腺癌細(xì)胞均表達(dá)這些標(biāo)示物，離出靶細(xì)胞；（２）陰性分離法則是利用免疫磁珠去除無關(guān)細(xì)因此會(huì)產(chǎn)生假陰性結(jié)果，而多種標(biāo)志物聯(lián)合使用，能有效提胞，利用抗ＣＤ４５抗體或抗ＣＤ６１抗體去除血液中的巨核細(xì)高此方法檢測(cè)的敏感性和特異性［８］。近年來，在此方法基礎(chǔ)胞和血小板，使靶細(xì)胞得以純化［４］。廣泛的陰性分選可選用上發(fā)展出了許多改良技術(shù)。其中，光纖陣列掃描術(shù)（Ｆｉｂｅｒ-抗ＣＤ２、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ３６、ＣＤ３８及血型糖蛋白Ａ抗體等。ｏｐｔｉｃＡｒｒｙＳｃａｎｎｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＦＡＳＴ）配置了擴(kuò)大視野的兩種方法相比較，陽(yáng)性分離法對(duì)腫瘤細(xì)胞的富集率較高。免

7、光學(xué)收集系統(tǒng)，能夠進(jìn)行連續(xù)掃描，有效避免了純化和富集疫學(xué)方法與形態(tài)學(xué)方法相比，具有操作簡(jiǎn)便快速，保持細(xì)胞步驟造成的ＣＴＣ丟失，能從大量免疫熒光染色的單核細(xì)胞活性，高選擇性等優(yōu)點(diǎn)，而且外加磁場(chǎng)也不會(huì)影響分離液中中找出ＣＴＣ。據(jù)報(bào)道，利用ＦＡＳＴ對(duì)三份混入１０-２１個(gè)人結(jié)的帶電溶質(zhì)的運(yùn)動(dòng)。直腸癌ＨＴ-２９細(xì)胞的外周血標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，平均敏感性達(dá)如磁性活化細(xì)胞分選系統(tǒng)（ｍａｇｎｅｔｉｃａｃｔｉｖａｔｅｄｃｅｌｌｓｏｒ-到９８％［９］。鐳射掃描細(xì)胞技術(shù)器（ｌａｓｅｒｓｃａｎｎｉｎｇｃｙｔｏｍｅｔｅｒｔｉｎｇｓｙｓ