臨床細(xì)菌學(xué)檢驗技術(shù)

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1、第三章臨床細(xì)菌學(xué)檢驗技術(shù)第一節(jié)細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查一、不染色標(biāo)本二、染色標(biāo)本第二節(jié)細(xì)菌分離培養(yǎng)和鑒定一、培養(yǎng)基的種類和選擇二、分離培養(yǎng)三、生化反應(yīng)四、鑒定第三節(jié)細(xì)菌的非培養(yǎng)檢測方法（簡介）一、免疫學(xué)檢測二、分子生物學(xué)檢測三、細(xì)菌毒素檢測四、動物實驗本章學(xué)習(xí)目標(biāo)1、形態(tài)學(xué)檢查（鏡檢）意義2、G染色法原理、方法、結(jié)果、意義和操作注意事項3、培養(yǎng)基概念、成分、分類與用途4、細(xì)菌分離方法及其用途5、常用生化反應(yīng)原理、培養(yǎng)基、結(jié)果判定、應(yīng)用6、細(xì)菌的非培養(yǎng)檢測方法及其意義（適用于？）第一節(jié)細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查是用普通光鏡、相位

2、差顯微鏡、熒光顯微鏡、電鏡，通過染色或不染色標(biāo)本,觀察細(xì)菌菌體的形態(tài)、大小、排列、特殊結(jié)構(gòu)及染色反應(yīng)等,是對細(xì)菌鑒定的一種手段。意義？**P45——通過細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查（鏡檢）可以迅速了解標(biāo)本中有無細(xì)菌及大致的菌量，而且根據(jù)細(xì)菌形態(tài)、結(jié)構(gòu)和染色性有助于對病原菌的初步識別和分類，為進(jìn)一步作生化反應(yīng)、血清學(xué)鑒定提供依據(jù)；對少數(shù)細(xì)菌還可根據(jù)形態(tài)特征作出初步鑒定，對臨床（早期診斷和治療疾?。┨峁┏醪叫畔⒆鳛閰⒖肌：喗椋猴@微鏡種類特點用途普通光學(xué)顯微鏡可見光直射,千倍染色細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)暗視野顯微鏡散射光,暗視野聚光器活菌

3、螺旋體動力相差顯微鏡相差板變光相與振幅活菌形態(tài)內(nèi)部結(jié)構(gòu)熒光顯微鏡高壓汞燈紫外光紫藍(lán)光抗原抗體助診斷熒光素標(biāo)記細(xì)菌病毒電子顯微鏡電子流,強磁透鏡表面與超微結(jié)構(gòu)透射、掃描，數(shù)十萬~一百萬光學(xué)顯微鏡普通光學(xué)顯微鏡的分辨率為0.25um。一般細(xì)菌都大于0.25um，故可用普通光學(xué)顯微鏡觀察。普通光學(xué)顯微鏡(lightmicroscope)顯微鏡放大法透射電鏡掃描電鏡電子顯微鏡與光學(xué)顯微鏡的基本區(qū)別光學(xué)顯微鏡電子顯微鏡分辨本領(lǐng)200nm/100nm接近0.1nm光源（波長）可見光400~700nm電子束0.01~0.

4、9nm紫外光200nm透鏡玻璃透鏡電磁透鏡真空不要求1.33×10-5~1.33×10-3Pa成像原理利用樣品對光的吸收利用樣品對電子的散射形成明暗反差和顏色變化和透射形成明暗反差一．不染色標(biāo)本檢查法觀察活菌的形態(tài)及運動情況；常用壓滴法或懸滴法、毛細(xì)管法（厭氧菌）二．染色標(biāo)本檢查法（一）常用染料堿性、酸性、復(fù)合染料（二）常用染色方法1.單染色法:觀察細(xì)菌的形態(tài)、大小、排列及某些特殊成分。2.復(fù)染色法(鑒別染色法):觀察細(xì)菌的大小、形態(tài)、排列、特殊結(jié)構(gòu)及染色性。細(xì)菌的形態(tài)檢查法不染色標(biāo)本檢查法:觀察細(xì)菌的大小

5、、形態(tài)、動力(主要)壓滴法懸滴法染色標(biāo)本檢查法:毛細(xì)管法單染色法——觀察細(xì)菌的形態(tài)、大小、排列革蘭氏染色法復(fù)染色法(鑒別染色法)抗酸染色法觀察細(xì)菌的大小、形態(tài)、排列、特殊結(jié)構(gòu)染色法特殊結(jié)構(gòu)及染色性熒光染色法細(xì)菌的檢查方法常用復(fù)染色法A.革蘭染色法:細(xì)菌常規(guī)染色法；染色結(jié)果紫（藍(lán)）色為G+菌，紅色為G—菌。B.抗酸染色法:常用于結(jié)核分枝桿菌等抗酸菌的檢查；抗酸菌染成紅色其他藍(lán)色。C.特殊染色法:細(xì)菌結(jié)構(gòu)如莢膜、芽胞、鞭毛以及細(xì)胞壁、異染顆粒等的染色。革蘭染色法：結(jié)晶紫碘液95%乙醇復(fù)紅抗酸染色：石炭酸復(fù)紅3%

6、鹽酸酒精堿性美蘭其它特殊染色染色法1min1min1min脫色5min脫色革蘭陽性革蘭陰性抗酸染色陽性1min革蘭氏染色法[原理]等電點學(xué)說、化學(xué)學(xué)說、細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)學(xué)說（1）細(xì)胞壁成分和結(jié)構(gòu)的不同：G+菌肽聚糖多、G-菌肽聚糖少，但脂類含量高（2）等電點的不同:G+菌pI2~3、G-菌pI4~5（3）G+含核糖核酸鎂鹽[基本程序]1.制片:涂片（干燥）→固定2.染色:1min1min半min1min結(jié)晶紫染液--盧戈氏碘液--95％酒精--稀釋石炭酸復(fù)紅染液--吸干后鏡檢(初染)水洗(媒染)水洗(脫色)水洗(

7、復(fù)染)水洗革（格）蘭染色法[影響因素]:1.培養(yǎng)基成分;2.培養(yǎng)條件;3.操作技術(shù)。操作技術(shù)方面指:涂片厚薄、干燥固定、脫色時間(此為關(guān)鍵步驟)[臨床意義]鑒別細(xì)菌、選擇藥物參考、與致病性有關(guān)[革蘭染色注意事項]1、涂片取菌（標(biāo)本）過程嚴(yán)格無菌操作；涂片厚薄均勻，一般涂呈云霧狀薄片，拇指大小；2、自然干燥為好，若烘干要緩慢，玻片不燙手為度；玻片標(biāo)本必須經(jīng)固定，一般火焰快速往返3次；3、玻片稍放涼方能加染料染色；染料加量適宜，要覆蓋整個涂片區(qū)域并不外流；4、染色步驟的順序不能調(diào)亂，時間嚴(yán)格把握，但脫色時間可依

8、涂片厚薄適當(dāng)調(diào)整；5、沖水時連同染料隨流水沖去，不宜先將染料倒去再沖；（這樣可能有未溶的染料殘渣積留在玻片）6、染色完畢要待玻片完全干燥才能滴油鏡檢。課堂檢測1、使用普通光學(xué)顯微鏡，采用懸滴法可觀察細(xì)菌的（）A鞭毛B芽孢C菌毛D動力E莢膜2、格蘭染色液中稀釋復(fù)紅的作用是（）A固定B初染C媒染D脫色E復(fù)染3、不屬于細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查范疇的是（）A暗視野顯微鏡觀察細(xì)菌動力B光鏡觀察細(xì)菌的排列方式C鞭毛染色觀察細(xì)菌染色性D