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《GBT17999.4-1999 SPF雞瓊脂擴散試驗 - 下載地址.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、GB/T17999.4-1999前言本標準是在我國建立的瓊脂擴散試驗(AGP)的基礎上，并參照美國SPAFAS公司AGP操作規(guī)程編制而成。SPF雞微生物學質量控制國家系列標準，包括SPF雞微生物學監(jiān)測總則和9種SPF雞微生物學檢測方法。本標準為《SPF雞瓊脂擴散試驗》。SPF雞微生物學檢測方法還包括以下部分:GB/T17999.1-1999SPF雞紅細胞凝集抑制試驗;GB/T17999.2-1999SPF雞血清中和試驗;GB/T17999.3-1999SPF雞血清平板凝集試驗;GB/T17999.5-1999SPF雞酶聯(lián)免疫吸附試驗;GB/T17999.
2、6--1999SPF雞胚敏感試驗;GB/T17999.7-1999SPF雞雞白痢沙門氏菌檢驗;GB/T17999.8-1999SPF雞試管凝集試驗;GB/T17999.9-1999SPF雞間接免疫熒光試驗。本標準由中華人民共和國農業(yè)部、國家科學技術部提出。本標準由農業(yè)部畜牧獸醫(yī)司歸口。本標準起草單位:農業(yè)部實驗動物研究中心、山東省農科院家禽研究所。本標準主要起草人:趙立紅、陳德威、張秀美、靳彥華、秦卓明。中華人民共和國國家標準GB/T17999.4一1999SPF雞瓊脂擴散試驗SPFchicken--Agargelprecipitationtest范圍本
3、標準規(guī)定了瓊脂擴散試驗所用試劑、材料，操作程序及結果判定等。本標準適用于SPF雞感染以下病毒后的沉淀抗體的監(jiān)測:禽流感病毒A型(AvianInfluezaVirusTypeA)、傳染性支氣管炎病毒(InfectiousBronchitisVirus)、傳染性法氏囊病病毒(InfectiousBursalDiseaseVirus)、傳染性喉氣管炎病毒(InfectiousLaryngotracheitisVirus),禽痘病毒(FowlPoxVirus)、馬立克氏病病毒(Marek'sDiseaseVirus)、禽腦脊髓炎病毒(AvianEncephalo
4、myelitisVirus),網狀內皮增生癥病毒(ReticuloendotheliosisVirus)、禽呼腸孤病毒(病毒性關節(jié)炎)(AvianReovirus),禽腺病毒I群(AvianAdenovirusGroupI)、多殺性巴氏桿菌(Paste-11amultocida)2原理瓊脂擴散試驗是一種沉淀反應伉原、抗體在含有電解質的瓊脂凝膠中，可以向四周自由擴散，二者互相結合，在最適比例處出現(xiàn)沉淀線。常采用已知抗原檢測相應的沉淀抗體.3試劑和材料3.1試劑3.1.1瓊擴抗原。31.2陽性血清。3.1.3被檢血清。3.1.40.01M,pH7.2,8%氯
5、化鈉磷酸緩沖液。3.1.5優(yōu)質瓊脂粉或瓊脂糖。3.2材料I2門瓊擴板。3.2.2打孔器12.3移液器。4操作程序4.1瓊脂板制備1g優(yōu)質瓊脂粉或0.8g一Ig瓊脂糖加人100ml,O.0lM,pH7.2,8%氯化鈉磷酸緩沖液中(檢測禽流感病毒感染時，同0.O1mol/L,pH6.4的800氯化鈉磷酸緩沖液配制瓊脂)，水浴加熱融化，稍涼((60C-65C)，倒入瓊擴板內(厚度為3mm)，待瓊脂凝固后，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?.2打孔用六角形打孔器在瓊脂板上按7孔梅花圖案打孔，孔徑3mm-4mm，孔距3mm用8“針頭挑出國家質量技術監(jiān)瞥局1999一11一10批準
6、2000一04一01實施標準分享網www.bzfxw.com免費下載GB/T17999.4-1999孔內瓊脂，挑出時從孔一側邊緣插入針頭，輕輕移動，等空氣進入孔底后，再向上挑出。4.3封底打孔完畢，封閉孔底將板底部在酒精燈上烘烤，使底部瓊脂微溶化即可，也可在瓊脂孔底部與板接觸處加少量溶化的100瓊脂或瓊脂糖。4.4加樣用移液器滴加抗原干中間孔，周圍1,4孔加陽性血清，其余孔加被檢血清。加祥時應將孔加滿，不應出現(xiàn)凹形面，也不應溢出4.5感作將瓊擴板加蓋保濕，放于37C溫箱內作用24h-72h，觀察沉淀線5結果判定5門陽性陽性血清與杭原孔之間有明顯沉淀線時，
7、被檢血清與抗原孔之間也形成沉淀線，并與陽性血清的沉淀線末端吻合，則被檢血清判為陽性。5.2弱陽性被檢血清與抗原孔之間沒有沉淀線，但陽性血清的沉淀線末端向被檢血清孔偏彎，此被檢血清判為弱陽性(需重復試驗)5.3陰性被檢血清與抗原孔之間不形成沉淀線，且陽性血清沉淀線直向被檢血清孔，則被檢血清判為陰性
