GBT17999.8-1999 SPF雞試管凝集試驗(yàn) - 下載地址.pdf

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1、GB/r17999.8-1999前言用血清平板凝集試驗(yàn)監(jiān)測(cè)雞白痢沙門(mén)氏菌感染，結(jié)果難以判定時(shí)，可用試管凝集試驗(yàn)(TA)進(jìn)行復(fù)檢，為此本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了SPF雞試管凝集試驗(yàn)。SPF雞微生物學(xué)質(zhì)量控制國(guó)家系列標(biāo)準(zhǔn)，包括SPF雞微生物學(xué)監(jiān)測(cè)總則和9種SPF雞微生物學(xué)檢測(cè)方法.本標(biāo)準(zhǔn)為《SPF雞試管凝集試驗(yàn)》。SPF雞微生物學(xué)檢測(cè)方法還包括以下部分:GB/T17999.1-1999SPF雞紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn);GB/T17999.2-1999SPF雞血清中和試驗(yàn);GB/T17999.3-1999SPF雞血清平板凝集試驗(yàn);GB/T179

2、99.4-1999SPF雞瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn);GB/T17999.5-1999SPF雞酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn);GB/T17999.6--1999SPF雞胚敏感試驗(yàn);GB/T17999.7-1999SPF雞雞白痢沙門(mén)氏菌檢驗(yàn);GB/T17999.9-1999SPF雞間接免疫熒光試驗(yàn)。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部、國(guó)家科學(xué)技術(shù)部提出本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)司歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:中國(guó)獸藥監(jiān)察所、農(nóng)業(yè)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:張學(xué)琴、陳德威、趙立紅。中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)Gs/T17999.8一1999SPF雞試管凝集試驗(yàn)SPFc

3、hicken-Tubeagglutinationtest1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了試管凝集試驗(yàn)所用試劑、材料，操作程序及結(jié)果判定等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于SPF雞感染雞白痢沙門(mén)氏菌或雞傷寒沙門(mén)氏菌后的抗體監(jiān)測(cè)。2原理同血清平板凝集試驗(yàn)，亦是細(xì)菌性抗原與相應(yīng)的抗體結(jié)合后在適量電解質(zhì)參與下，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象，只是結(jié)果判定以凝集價(jià)表示3試劑和材料3.1抗原:試管凝集試驗(yàn)用雞白痢一雞傷寒抗原(含菌10億/mL)32陽(yáng)性、陰性血清。13被檢血清口3.4o.5Y,石炭酸生理鹽水:了，炭酸59;a化鈉8.59;蒸餾水1000mL;混

4、合溶化，6.897Pa20min消毒備用15常規(guī)血清學(xué)試驗(yàn)用品。4操作程序4.1每份被檢血清需要5支小試管(口徑8mm-10mm)。第1管加石炭酸生理鹽水1.8mL，其余管各加Iml。4.2第1管加被檢血清。.2mL，與石炭酸生理鹽水混勻(使成1:10稀釋)。取1mL移至第2管，混勻后連續(xù)倍比稀釋至第4管，最后從第4管內(nèi)吸出1mL棄去。如此各管血清最后稀釋依次為I:20,1:40,1,80,1:160,1:3204.3各管加入抗原液1mL4.4振蕩混勻后置37C感作24h，觀察結(jié)果。4.5梅次試驗(yàn)須設(shè)三種對(duì)照各一份。4

5、.5.1抗原對(duì)照:在試管中加抗原液1mL，再加。.5%石炭酸生理鹽水1mLo4.5.2陽(yáng)性血清對(duì)照陽(yáng)性血清稀釋至原來(lái)效價(jià)，每管加入抗原液1mL4.5.3陰性血清對(duì)照:操作方法同被檢血清。4.5.4全部試管振蕩后，置37`C24h后移入4'C-8C冰箱過(guò)夜，使結(jié)果更易判定4.6結(jié)果觀察國(guó)家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局1999一11-10批準(zhǔn)2000一04一O1實(shí)施標(biāo)準(zhǔn)分享網(wǎng)www.bzfxw.com免費(fèi)下載GB/T17999.8-19994.6.1從40C-8℃冰箱取出試管架，暫不振動(dòng)試管。4.6.2輕輕取出每支試管，先觀察試管內(nèi)上清

6、液和管底凝集物，再輕振管底，使凝塊從管底升起，最后按液體清濁、凝塊大小記錄。4.6.3觀察結(jié)果時(shí)應(yīng)首先觀察抗原對(duì)照與陰性血清對(duì)照，均應(yīng)呈“一，’(即不凝集)，陽(yáng)性血清對(duì)照呈不同程度凝集，表明試驗(yàn)可靠。4.6.4凝集結(jié)果判定見(jiàn)表to表1試管凝集結(jié)果判定類(lèi)別試管所見(jiàn)結(jié)果1細(xì)菌全部形成凝塊，上層液完全透明++++2大部分細(xì)菌形成凝塊，上層液透明度達(dá)750/a+++3約50%細(xì)菌形成明顯可見(jiàn)凝集塊，上層液透明度達(dá)50%+十4僅有少部分細(xì)菌形成小凝塊，上層液透明度達(dá)25%+無(wú)凝集塊，液體均勻混濁(有部分菌體因靜置而沉于管底，輕輕

7、搖后細(xì)5菌如云煙狀升起，但很快消失)4.6.5效價(jià)以呈現(xiàn)“++”凝集試管的血清最高稀釋倍數(shù)作為該血清的凝集效價(jià)。5結(jié)果判定凝集價(jià))1:80為陽(yáng)性;凝集價(jià)為1:40為可疑;凝集價(jià)鎮(zhèn)1:20為陰性。