GBT18638-2002 流行性乙型腦炎診斷技術(shù) - 下載地址.pdf

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1、CB/'r18638--2002前臺流行性乙1q'j腦炎又稱日本乙型腦炎(JapaneseBencephalitic)，是山流行性乙NUR炎病毒引起的一種蚊媒性人獸共患傳染病成年動物和人常呈隱性感染，幼齡動物特別是馬感染后，可發(fā)生腦炎癥狀。妊娠母豬可引起流產(chǎn)、死胎及木乃伊胎，公豬翠丸腫大，兒童可發(fā)生嚴(yán)重的腦炎。多發(fā)生于7-9月份。我國許多省(Ili)都有本病發(fā)生，特別是六t-f年代，發(fā)病率最高。對人畜的健康可造成嚴(yán)重的威脅世界動物衛(wèi)生組織和日本的資料，都采用病毒分離鑒定、免疫熒光試驗、血凝抑制試驗、補體結(jié)合試驗、血清中和試驗等進(jìn)行診斷我國對木病的研究報道較多，而比

2、較常用的診斷方法仍是本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的病毒分離鑒定、血凝抑制試驗、補體結(jié)合試驗病毒分離鑒定適用于流行性乙型腦炎新疫區(qū)的確定和病畜的確診。間接免疫熒光試驗適用于可疑流行性乙型腦炎病毒標(biāo)本的快速檢測和病毒分離株的初步鑒定。補體結(jié)合試驗，由于補體結(jié)合抗體一般在病后2-3周出現(xiàn)，5-6周達(dá)高峰，并可維持1年以L，故可適用于流行性乙A9腦炎的較早期診斷和流行病學(xué)調(diào)查，是最常用的方法。根據(jù)當(dāng)時的實際需要，可任選一種或兩種檢疫方法。以達(dá)到準(zhǔn)確診斷的卜!的。本標(biāo)準(zhǔn)的實施，對提高乙型腦炎的診斷和疫情預(yù)測水平，及時采取防制措施，保證人畜健康，將起到重要的作用。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B都是標(biāo)準(zhǔn)

3、的附錄本標(biāo)準(zhǔn)由，!，華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:中國人民解放軍農(nóng)牧大學(xué)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:李佑民、宣華、李金中、劉振潤。中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/'r18638--2002流行性乙型腦炎診斷技術(shù)DiagnostictechniquesforepidemicencephalitisB范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了流行性乙型腦炎的病毒分離與鑒定、間接免疫熒光試驗、補體結(jié)合試驗、血凝抑制試驗等技術(shù)要求本標(biāo)準(zhǔn)適用于l-1岸、產(chǎn)地及集散地、飼養(yǎng)單位(或個人)的豬、馬、騾、驢、牛、羊等的流行性乙型腦炎的診斷和檢疫2病毒的分離與鑒定2門

4、材料準(zhǔn)備2門門器材:細(xì)胞培養(yǎng)瓶〔或管)，吸管.中試管，三角燒瓶，37C水浴箱,37C恒溫箱，普通冰箱及低溫冰箱，離心機及離心管，研磨器械，普通光學(xué)顯微鏡，G5級玻璃濾器，孔徑。.45lam的微孔濾膜，0.25mL注射器及針頭。2.1.2試劑:漢克氏(Hanks)4,0.5%水解乳蛋白Hanks液，2萬工U/m工青霉素液，2萬Ixg/ML.鏈霉素液，7%碳酸氫鈉液,1%胰蛋白酶液,1%酚紅(中性)液，伊格爾氏(Eagle)最低必要成分培養(yǎng)液(EMEM)，小牛血清2.1.3小動物:小鼠(6g-8g)、乳鼠2門.4雞胚細(xì)胞、綠猴腎傳代細(xì)胞(Vero)、倉鼠腎傳代細(xì)胞(B

5、HK,,)、白蚊伊蚊C6/36傳代細(xì)胞等。2-2病毒分離2.2門樣品的采取和運送2.2門門在流行的早期和發(fā)病的早期(即病毒血癥階段)，無菌采取病畜的血液或腦脊髓液。2.2.1.2應(yīng)在病畜死亡后3h內(nèi)(越早越好)采取腦組織(選大腦皮質(zhì)、腦干、中腦、海馬回及橋腦)數(shù)小塊放于滅菌玻璃瓶2.2.1.3豬應(yīng)采取流產(chǎn)死胎的腦組織，置冰箱內(nèi)立即送檢2.2.1.4不能立即檢查者，應(yīng)放一25C一一30C冰箱，或加50%甘油生理鹽水，4C保存送檢2.2.2樣品的處理2.2-2.1血液應(yīng)分離出血清或血漿。2.2.2.2腦脊髓液可直接應(yīng)用。2.2.2.3腦組織應(yīng)研磨成糊狀，加入0.5%水

6、解乳蛋白Hanks液(或堿性肉湯或10%脫脂奶生理Sh水)，制成10寫懸液，3000r/min離心30min，吸取上清液，加入青霉素500IU/ml和鏈霉素500pg/ml，在4C處理3h-4h無污染者可不加青、鏈霉素處理)，即得接種樣品。2.2-2.4懷疑有污染的樣品，也可用。.45lam微孔濾膜過濾法處理。2.2.3動物分離法2.2-3.1取6g-8g小鼠10只(或3-5日齡乳鼠一窩)，用左手固定，在耳與眼之間用碘酒消毒右手持吸取接種樣品的0.25ml·注射器在消毒部刺人硬墮些互旦生生二竺生燮絲墊些二生魚塑中華人民共和國國家質(zhì)f監(jiān)督檢驗檢疫總局2002-02-

7、19批準(zhǔn)2002-05-01實施標(biāo)準(zhǔn)分享網(wǎng)www.bzfxw.com免費下載CB/T18638-20020.01ml，一。.02ml)。然后用左手拇指及食指抓住小鼠頭頂部皮膚，翻轉(zhuǎn)左手，使小鼠腹部朝上，將其尾部夾在左手掌與小手指之間，消毒腹部，右手持注射器向腹腔內(nèi)注人樣品0.2m1_-0.5m工。2.2.3.2對照小鼠2只，按同法同劑量注射稀釋液2.2.13接種后2d--4d，如對照鼠正常，而注射樣品的小鼠表現(xiàn)松毛、弓背、沉郁、震顫、繞圈、后肢麻痹、繼而死亡者，應(yīng)解剖取鼠腦組織，按2.2.2.3制成接種樣品，按2.2.3.1再接種小鼠。連續(xù)2代接種小鼠均有發(fā)病致死

8、者，而且未