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1、分類號(hào)：Ｏ６５單位代碼：１０１８３研究生學(xué)號(hào)：２０１５３３２０６３密級(jí)：公開吉林大學(xué)碩士學(xué)位論文學(xué)術(shù)學(xué)位（）單酯型烏頭類總生物堿的制備方法及其應(yīng)用研究ＳｔｕｄｉｅｓｏｎＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＭｏｎｏｅｓｔｅｒＡｃｏｎｉｔｉｕｍＴｏｔａｌＡｌｋａｌｏｉｄｓ作者姓名：姜奕甫專業(yè)：分析化學(xué)研究方向：藥物分析指導(dǎo)教師：李緒文教授培養(yǎng)單位：化學(xué)學(xué)院２０１８年６月摘要單酯型烏頭類總生物堿的制備方法及其應(yīng)用研究烏頭類生物堿是毛茛科烏頭屬植物（川烏、草烏等）的主要藥效成分，
2、具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、強(qiáng)心等多種藥理作用，同時(shí)也是毒性成分，其主要損害循環(huán)系統(tǒng)、心臟及中樞神經(jīng)系統(tǒng)。烏頭類生物堿屬于二萜類生物堿，通常分為雙酯型烏頭堿和單酯型烏頭堿。烏頭屬植物中最常見的三種雙酯型是烏頭堿、新烏頭堿和次烏頭堿，它們即是有效成分也是毒性成分。因此烏頭屬植物藥材必須經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的炮制，使這三種雙酯型烏頭堿水解掉C-8位乙酰基而成為相應(yīng)的單酯型烏頭堿（苯甲酰烏頭堿、苯甲酰新烏頭堿和苯甲酰次烏頭堿），或進(jìn)一步水解掉C-14位苯甲酰基而成為相應(yīng)的烏頭原堿（烏頭原堿、新烏頭原堿和次原烏頭堿）后使用。常用的炮制方法包括蒸制、煮制、砂燙法和加入輔料法等。國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究表明，上述單酯
3、型烏頭堿仍具有雙酯型烏頭堿的藥理作用，因此單酯型烏頭堿的制備方法與應(yīng)用研究已引起人們的廣泛關(guān)注。由于單酯型烏頭堿在烏頭屬植物中含量極低，因此一般通過(guò)水解雙酯型烏頭堿的方法來(lái)制備單酯型烏頭堿。本文首先研究了通過(guò)水解雙酯型烏頭類總生物堿來(lái)制備單酯型烏頭類總生物堿的方法，并對(duì)雙酯型烏頭類總生物堿和單酯型烏頭類總生物堿的急性毒性及抗腫瘤活性進(jìn)行了對(duì)比研究，最后研究了以單酯型烏頭類總生物堿為原料制備貼膏劑的方法并建立了其中苯甲酰新烏頭堿和苯甲酰次烏頭堿的HPLC測(cè)定方法。首先，本文采用乙酸乙酯-氨水作為提取液，從川烏藥材中滲漉提取總生物堿。經(jīng)各種影響因素的考察，最終確立的提取條件為：干燥的川
4、烏粉末先用乙酸乙酯（含氨水2%）浸漬5h后進(jìn)行滲漉提取，用薄層色譜跟蹤檢測(cè)，直至提取液中檢測(cè)不到生物堿。將提取液濃縮后用0.5%的稀鹽酸酸化至pH=1～2，乙酸乙酯萃取，酸水層再用0.5%的氫氧化鈉水溶液堿化至pH=11～12，再用乙酸乙酯萃取，減壓回收乙酸乙酯，干燥，得雙酯型烏頭類總生物堿。接著，以苯甲酰新烏頭堿（BM）和苯甲酰次烏頭堿（BH）的轉(zhuǎn)化率為考察指標(biāo)，通過(guò)單因素考I察和正交試驗(yàn)確立了以上述烏頭類總生物堿為原料制備單酯型烏頭類總生物堿的降解條件。最佳降解條件為：使用體積比為55%的1,4-二氧六環(huán)水溶液為溶劑，液料比為16：1（v/w,mL/g），165℃加熱回流6h。
5、在該條件下，苯甲酰新烏堿的轉(zhuǎn)化率為68.9%，苯甲酰次烏頭堿的轉(zhuǎn)化率為58.5%。此方法具有簡(jiǎn)單，快捷，轉(zhuǎn)化率較高的優(yōu)點(diǎn)。其次，本文對(duì)雙酯型烏頭類總生物堿和單酯型烏頭類總生物堿的急性毒性及抗腫瘤活性進(jìn)行了對(duì)比研究。小鼠經(jīng)口灌胃急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，雙酯型烏頭類總生物堿的半數(shù)致死劑量（LD50）為26.2mg/kg，屬于高毒性物質(zhì)，而單酯型烏頭類總生物堿半數(shù)致死劑量（LD50）為775.8mg/kg，屬于低毒性物質(zhì)，雙酯型烏頭堿降解為單酯型烏頭堿后其毒性約降低至原來(lái)的三十分之一。利用CCK-8細(xì)胞毒活性試驗(yàn)，考察了雙酯型烏頭類總生物堿和單酯型烏頭類總生物堿對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞和肺癌A
6、549的增值抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明烏頭類總生物堿對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2和肺癌細(xì)胞A549均有一定抑制作用，烏頭類總生物堿對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2的IC-1-150=14.5μg·mL，對(duì)肺癌細(xì)胞A549的IC50=45.0μg·mL。單酯型烏頭類總生物堿在濃度50μg·mL-1時(shí)對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2和肺癌細(xì)胞A549具有一定的抑制活性。單酯型烏頭類總生物堿對(duì)腫瘤細(xì)胞HepG2，A549的抑制作用沒有雙酯型烏頭類總生物堿強(qiáng)。文獻(xiàn)表明單酯型烏頭類生物堿具有較好的消炎鎮(zhèn)痛的功效，據(jù)此本文利用得到的單酯型烏頭類生物堿制備了一種消炎鎮(zhèn)痛貼膏劑，探討了其制備工藝并建立了其中有效成分的含量測(cè)定方法。貼
7、膏劑的制備方法為將水相（單酯型烏頭類總生物堿乙醇溶液）和油相（甘油、聚丙酸鈉、甘羥鋁、EDTA-二鈉鹽、鈦白粉及酒石酸）在真空狀態(tài)下混合攪拌，再經(jīng)涂布，切片即得。本文建立的貼劑中BM和BH的HPLC含量測(cè)定方法為：以二氯甲烷-氨水為提取溶劑，用加熱回流法提取貼膏劑中的BM和BH，并利用高效液相色譜進(jìn)行含量測(cè)定。高效液相色譜條件為：色譜柱AcchromTnature-C18（4.6mm×250mm，5μm）column，柱溫35.0℃，流速1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)2
