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1、第三章分子熒光分析法Chapter3MolecularFluorescence第一節(jié)概述一、分子熒光分析法利用物質(zhì)分子的熒光進(jìn)行分析測定的方法利用物質(zhì)分子的熒光進(jìn)行分析測定的方法物質(zhì)分子第一節(jié)概述一、分子熒光分析法利用物質(zhì)分子的熒光進(jìn)行分析測定的方法利用物質(zhì)分子的熒光進(jìn)行分析測定的方法物質(zhì)分子二、分子熒光與熒光量子效（產(chǎn)）率分子熒光與熒光量子效產(chǎn)率1.分子熒光化合物分子吸收電磁波并發(fā)射出另一波長電磁波化合物分子吸收電磁波并發(fā)射出另一波長電磁波吸收電磁波入ex、10定性km、If發(fā)射光定量激發(fā)光2.熒光量子效產(chǎn)）率熒光分子發(fā)射與吸收的光量子數(shù)Z比熒光量子效（產(chǎn)率熒光強(qiáng)度（If）發(fā)
2、射的光量子數(shù)?f==吸收的光量子數(shù)吸收的光強(qiáng)度（la）第一節(jié)概述一、分子熒光分析法三、溶液的熒光強(qiáng)度If=2.3?flOelc=Kc該關(guān)系式是如何得來的？該關(guān)系式是如何得來的？?f=lf/lalf=?flaA=?logIt=8C110利用物質(zhì)分子的熒光進(jìn)行分析測定的方法利用物質(zhì)分子的熒光進(jìn)行分析測定的方法物質(zhì)分子?f=If/Ia熒光溶液的吸光度三0.05熒光溶液的吸光度熒光定量分析基本關(guān)系式二、分子熒光與熒光量子效(產(chǎn))率分子熒光與熒光量子效產(chǎn)率It=I0xl0?wcl=I0xe?2.3￡clIa=I0?11=I0(1?e?2.3ecl)(?2.3ecl)2(?2.3ecl)3
3、?2.3scl=1?2.3ecl??????If=?fI0(l?e?2.38cl)e2!3!?2.3scl=1?2.3ecl若de<0.05eIf=2.3?flOelc=Kc第一節(jié)概述一、分子熒光分析法三、溶液的熒光強(qiáng)度If=2.3?fIOwlc=Kc四、溶液熒光的猝滅熒光物質(zhì)分子其它物質(zhì)分子相互作用引起熒光強(qiáng)度降低的現(xiàn)象熒光猝滅法利用物質(zhì)分子的熒光進(jìn)行分析測定的方法利用物質(zhì)分子的熒光進(jìn)行分析測定的方法物質(zhì)分子?f=If/Ia熒光溶液的吸光度S0.05熒光溶液的吸光度熒光定量分析基本關(guān)系式二、分子熒光與熒光量子效（產(chǎn)）率分子熒光與熒光量子效產(chǎn)率第二節(jié)熒光光譜儀第二節(jié)熒光光譜儀一
4、、熒光光譜儀的基本結(jié)構(gòu)光源激發(fā)光單色器狹縫發(fā)射光單色器信號顯示系統(tǒng)檢測器10樣品池透射光ItF第二節(jié)熒光光譜儀一、熒光光譜儀的基本結(jié)構(gòu)二、熒光光譜儀的主要部件1?光源光源激發(fā)光單色器樣品池為熒光測定提供足夠強(qiáng)度的、穩(wěn)定的激發(fā)光為熒光測定捉供足夠強(qiáng)度的、穩(wěn)定的激發(fā)光足夠強(qiáng)度的伍燈、高壓汞燈、伍燈、高壓汞燈、激光器發(fā)射光單色器檢測器第二節(jié)熒光光譜儀一、熒光光譜儀的基本結(jié)構(gòu)二、熒光光譜儀的主要部件1?光源眾燈、高壓汞燈、眾燈、高壓汞燈、激光器將光源發(fā)出的復(fù)合光分解為單色光干涉濾光片、干涉濾光片、光柵發(fā)射光單色器檢測器光源激發(fā)光單色器樣品池2.激發(fā)單色器第二節(jié)熒光光譜儀一、熒光光譜儀的
5、基本結(jié)構(gòu)二、熒光光譜儀的主要部件1?光源眾燈、高壓汞燈、眾燈、高壓汞燈、激光器干涉濾光片、干涉濾光片、光柵發(fā)射光單色器檢測器光源激發(fā)光單色器樣品池2.激發(fā)單色器3.吸收池盛放試樣的容器不吸光、無熒光、四壁透明不吸光、無熒光、熔融石英第二節(jié)熒光光譜儀一、熒光光譜儀的基本結(jié)構(gòu)二、熒光光譜儀的主要部件1?光源眾燈、高壓汞燈、佩燈、高壓汞燈、激光器干涉濾光片、干涉濾光片、光柵將熒光物質(zhì)產(chǎn)生的熒光分解為單色光光柵發(fā)射光單色器檢測器光源激發(fā)光單色器樣品池2.激發(fā)單色器3.吸收池4.發(fā)射單色器熔融石英四壁透明第二節(jié)熒光光譜儀一、熒光光譜儀的基本結(jié)構(gòu)二、熒光光譜儀的主要部件1?光源眾燈、高壓汞
6、燈、佩燈、高壓汞燈、激光器干涉濾光片、干涉濾光片、光柵光柵發(fā)射光單色器檢測器光源激發(fā)光單色器樣品池2.激發(fā)單色器3.吸收池5.檢測器4.發(fā)射單色器熔融石英四壁透明將熒光信號轉(zhuǎn)換為電學(xué)信號靈敏度高光電管、光電倍增管、光電管、光電倍增管、CCD、二極管陣列、光子計(jì)數(shù)器、二極管陣列、第二節(jié)熒光光譜儀一、熒光光譜儀的基本結(jié)構(gòu)二、熒光光譜儀的主要部件三、激發(fā)光選擇與激發(fā)光譜激發(fā)光譜：熒光強(qiáng)度與激發(fā)光波長間的關(guān)系曲線。激發(fā)光譜：熒光強(qiáng)度與激發(fā)光波長間的關(guān)系曲線。激發(fā)光波長：激發(fā)光波長：最大激發(fā)波長入ex與紫外吸收光譜一致發(fā)射光單色器檢測器光源激發(fā)光單色器樣品池第二節(jié)熒光光譜儀一、熒光光譜儀
7、的基本結(jié)構(gòu)二、熒光光譜儀的主要部件三、激發(fā)光選擇與激發(fā)光譜四、發(fā)射光選擇與發(fā)射光譜發(fā)射光譜：熒光強(qiáng)度與發(fā)射光波長間的關(guān)系曲線。發(fā)射光譜：熒光強(qiáng)度與發(fā)射光波長間的關(guān)系曲線。發(fā)射光波長：發(fā)射光波長：最大發(fā)射波長Xem光源激發(fā)光單色器樣品池最大激發(fā)波長入ex發(fā)射光單色器檢測器與激發(fā)光波長無關(guān)Stokes位移位移鏡像規(guī)則第三節(jié)分子熒光分析法的應(yīng)用一、熒光分析法的特點(diǎn)1.靈墩度高靈墩度高（1?lOOppb）暗背景下測量2.選擇性好3.提供的物理參數(shù)較多4.方法簡便、試樣用量少方法簡便、二、熒光定性分析
