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《XCL1基因論文豬XCL1基因原核表達(dá)多克隆抗體制備及產(chǎn)物活性鑒定》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、XCL1基因論文：豬XCL1基因原核表達(dá).多克隆抗體制備及產(chǎn)物活性鑒定【屮文摘要】趨化因子(chemokines,chemoattractantcytokines)是能夠使細(xì)胞定向移動(dòng)的小分子細(xì)胞因子，在促使細(xì)胞遷移和活化過(guò)程中發(fā)揮重要作用，對(duì)機(jī)體的免疫系統(tǒng)非常重要。淋巴細(xì)胞趨化因子(Lymphotactin,Lptn)是C族趨化因子的一員，也被稱為淋巴趨化因子配體1(XCL1)。淋巴趨化因子受體XCR1與XCL1相互作用參與呈遞抗原、激活T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞,發(fā)揮機(jī)體的細(xì)胞免疫功能，能夠調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)平衡，增強(qiáng)粘膜免疫、抗腫瘤免疫，在感染性疾病過(guò)程中誘發(fā)炎癥反應(yīng)等。柳超等已構(gòu)建pEG
2、FP-PLptn真核表達(dá)載體，證實(shí)綠色熒光融合蛋白在體外具有趨化活性，但并未進(jìn)行進(jìn)一步的研究。本研究首次構(gòu)建了原核表達(dá)載體pET-32a-XCLl,摸索了原核表達(dá)的最佳誘導(dǎo)和純化條件，采用HiTrapTMChelatingHP純化蛋白，SDS-PAGE檢測(cè)重組蛋白純化情況,Western-blot檢測(cè)重組蛋白表達(dá)情況。并以此重組蛋白作為抗原，制備多克隆抗體，雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、間接ELISA檢測(cè)多克隆抗體效價(jià),MTT法檢測(cè)豬XCL1對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的影響,為研究XCL1在豬中的功能提供了素材。主要研究?jī)?nèi)容與結(jié)果如下：1?根據(jù)NCBI上豬XCL1基因序列，設(shè)計(jì)引物,從豬淋巴結(jié)克隆得到0.2
3、7kb的片段。將片段克隆至PMD-19T載體中，篩選岀陽(yáng)性質(zhì)粒送測(cè)序,結(jié)果表明該片段序列正確。2.將基因構(gòu)建到原核表達(dá)載體pET-32a(+),在大腸桿菌BL21(DE3)中進(jìn)行原核表達(dá)，純化蛋口，免疫新西蘭大白兔，制備多克隆抗體。3.雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)顯示抗原抗體的結(jié)合比為1：&間接ELISA檢測(cè)到抗體效價(jià)達(dá)到1:12800o4.通過(guò)MTT法試驗(yàn)檢測(cè)重組蛋白XCL1對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果表明重組蛋白XCL1能促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖，而此實(shí)驗(yàn)制備的多克隆抗體可以阻斷這種效應(yīng)?！居⑽恼緾hemokines(chemoattractantcytokines)arecytokinesof
4、smallmolecularsizethatcaninducedirectedchemotaxis,andplayanimportantroleintheprocessofcellmigrationandactivation.Thus,chemikinesareveryimportantcomponentsintheimmunesystem.Lymphocytechemotacticfactor(Lymphotactin,Lptn),alsoknownaslymphoidchemokineligand1(XCL1),isamemberofCchemokinefamily.Theint
5、eractionbetweenXCR1andXCL1involvesinantigenpresentation,TlymphocytesandNKcellsactivation,andthecellularimmunefunctionexertionprocesses,thuscanregulateimmunebalanceandinduceinflammatoryreactionintheprocessofinfectiousdisease,andcanenhancemucosalimmunityandanti-tumorimmunity.Liuetal(2010)hadconst
6、ructedeukaryoticexpressionvectorpEGFP-PLptn,andconfirmedthatthefusionproteinwithgreenfluorescentmarkerdisplayschemotacticcharacteristicinvitro,butfurtherstudywasnotcarriedout?Inthisstudy,wefirsteverconstructedprokaryoticexpressionvectorpET-32a-XCLlandfoundouttheoptimumconditionsofitsexpressiona
7、ndpurification.First,purifytherecombinantproteinusingHiTrapTMChelatingHPchromatographiccolumn.Second,checkthepurifiedproductusingSDS-PAGEtechnique?Thirdly,detecttheexpressionoftherecombinantproteinusingwestern-blot?Immunizetheexpe
