層析技術(shù)在中藥分析中的應(yīng)用

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1、層析技術(shù)在中藥分析中的應(yīng)用析技術(shù)的應(yīng)用與發(fā)展，對丁?植物各類化學(xué)成分的分離鑒定工作起到重人的推動作用。如中藥丹參的化學(xué)成分在30年代僅從中分離到3種脂溶性色索，分別稱為丹參酮I、1【、III。但以后進(jìn)一步的研究，發(fā)現(xiàn)除丹參酮I為純品外，II、III、均為混合結(jié)品。此后通過各種層析方法，迄今已發(fā)現(xiàn)15種單體（其中有4種為我國首次發(fā)現(xiàn)）。目前新的層析技術(shù)不斷發(fā)展，隨著層析理論和電子學(xué)、光學(xué)、計(jì)算機(jī)等技術(shù)的應(yīng)用，層析技術(shù)已日趨完善。一.層析法的基本原理：層析過程是基丁-樣品紐分在互不相溶的兩“相”溶劑之間的分配系數(shù)之差（

2、分配層析），組分對吸附劑吸附能力不同（吸附層析），和寓子交換，分了的大?。ㄅ抛鑼游觯┒蛛x。通常又將一般的以流動和為氣體的稱為氣和層析，流動和為液體的稱為液和層析。吸附層析法（AdsorplionChromatography）（一）吸附劑、溶劑與被分離物性質(zhì)的關(guān)系：液一固吸附層析是運(yùn)用較多的一種方法，特別適用于很多中等分子量的樣品（分子量小于I,000的低揮發(fā)性樣品）的分離，尤其是脂溶性成分一一般不適用于高分子暈樣品如蛋白質(zhì)、多糖或離子型親水住化合物等的分離。吸附層析的分離效果，決定于吸附劑、溶劑和被分離化合物的性

3、質(zhì)這三個因索。1.吸附劑：常用的吸附劑有硅膠、氧化鋁、活性炭、硅酸鎂、聚酰胺、硅藻土等。（1）硅膠：層析用硅膠為一多孔性物質(zhì)，分子中具有硅氧烷的交鏈結(jié)構(gòu)，同時在顆粒表而乂有很多硅醇基。硅膠吸附作用的強(qiáng)弱與硅醇基的含量多少有關(guān)。硅醇基能夠通過氫鍵的形成而吸附水分，因此硅膠的吸附力隨吸若的水分増加而降低。若吸水罐超過17%，吸附力極弱不能用作為吸附劑，但可作為分配層析中的支持劑。對硅膠的活化，當(dāng)硅膠加熱至100?110°C時，硅膠表面因氮鍵所吸附的水分即能被除去。當(dāng)溫度升高至500°C時，硅膠農(nóng)面的硅醇基也能脫水縮臺轉(zhuǎn)

4、變?yōu)楣柩跬殒I，從而喪失了因氫鍵吸附水分的活往，就不再冇吸附劑的性質(zhì)，雖用水處理亦不能恢復(fù)其吸附活性。所以硅膠的活化不宜在較高溫度進(jìn)行（一般在170cC以上即有少量結(jié)合水失去）。硅膠是一種酸性吸附劑，適用于小性或酸性成分的層析。同時硅膠乂是--種弱酸性陽離子交換劑,其農(nóng)面上的硅醇基能釋放弱酸性的氮離子，當(dāng)遇到較強(qiáng)的堿注化臺物，則可因離子交換反應(yīng)而吸附堿性化合物。（2）氧化鋁：氧化鋁可能帶有堿性（因其中可混有碳酸鈉等成分），對于分離一些堿性中草藥成分，如生物堿類的分離頗為理想。但是堿性氧化鋁不宜用于醛、側(cè)、醋、內(nèi)酯等類

5、型的化介物分離。因?yàn)橛袝r堿性氧化鋁可與上述成分發(fā)生次級反應(yīng)，如片構(gòu)化、氧化、消除反應(yīng)等。除去氧化鋁中絢堿性雜質(zhì)可用水洗至中性，稱為屮性氧化鋁。屮性氧化鋁仍屬于堿性吸附劑的范疇，木適用于酸性成分的分離。用稀硝酸或稀鹽酸處理氧化鋁，不僅可中和氧化鋁中含冇的堿性雜質(zhì)，并可使氧化鋁顆粒表面帶有N03—?或CI一的陰離子，從而具有離于交換劑的性質(zhì)，適合于酸性成分的層析，這種氧化鋁稱為酸性氧化鋁。供層析用的氧化鋁，用于拄層析的，其粒度要求在100?160目Z間。粒度大子100目，分離效果差：小于16011,溶濃流速人慢，易使譜

6、帶擴(kuò)散。樣品與氧化鋁的用雖比，一般在1：20?50之間層析柱的內(nèi)徑與柱長比例在1：10-20之向。在用溶劑沖洗柱時，流速不宜過快，洗脫液的流速一般以每半?1小時內(nèi)流出液體的亳升數(shù)與所用吸附劑的重量（克）相等為合適。（3）活性炭：是使用較多的一種非極性吸附劑。一般需要先用稀鹽酸洗滌，其次用乙醇洗，再以水洗凈，于80°C干燥后即可供層析用。層析用的活性炭，最好選用顆?；钭⑻浚魹榛钚蕴考?xì)粉，則需加入適量硅藻土作為助濾劑一并裝柱，以免流速太慢。活性炭主要且于分離水溶性成分，如氨基酸、糖類及某些貳?；钚蕴康膬訛槲阶饔?，在

7、水溶液屮最強(qiáng)，在冇機(jī)溶劑屮則較低弱。故水的洗脫能力繪弱，而有機(jī)溶劑則較強(qiáng)。例如以醇水進(jìn)行洗脫時，則隨乙醇濃度的遞增而洗脫力增加。活性炭對芳香族化合物的吸附力大于脂肪族化合物，對大分子化合物的吸附力大于小分子化合物。利用這些吸附性的差別，可將水溶性芳香族物質(zhì)與脂肪族物質(zhì)分開，單糖與多糖分開，氨基酸與多肽分開。2.溶劑：層析過程中溶劑的選擇，對組分分離關(guān)系極大。在柱層析時所用的溶劑（單一劑或混合溶劑）習(xí)慣上稱洗脫劑，用于薄層或紙層析時常稱展開劑。洗脫劑的選擇，須根據(jù)被分離物質(zhì)與所選用的吸附劑性質(zhì)這兩者結(jié)合起來加以考慮在

8、用極性吸附劑進(jìn)行層析時，當(dāng)被分離物質(zhì)為弱極性物質(zhì)，一般選用弱極性溶劑為洗脫劑；被分離物質(zhì)為強(qiáng)極性成分，則須選用極性溶劑為洗脫劑。如果對某一極性物質(zhì)用吸附性較弱的吸附劑（如以硅藻土或滑石粉代替硅膠），貝9洗脫劑的極性亦須相應(yīng)降低。在柱層操作時，被分離樣品在加樣時可采用于法，亦可選一適宜的溶劑將樣品溶解后加入。溶解樣品的溶劑應(yīng)選擇極性較小的，以便被分離的成分可以