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1、高效液相色譜測定葛根苓連丸中葛根素含量摘要:目的建立高效液相色譜測定葛根苓連丸中葛根素含量的方法。方法色譜柱:DiamonsilC18(250x4.6mm,5um);流動相:甲醇-水(15:85);流速:ImL/min;波長:250nm;柱溫:30°Co結(jié)果葛根素濃度在2.0-50.0ug/mL(r=0.9999)范圍內(nèi)線性關系良好,平均回收率為99.8%(RSD=1.03%)o結(jié)論建立的方法簡便、準確可靠,可用于葛根苓連丸中葛根素含量測定。關鍵詞:葛根苓連丸;葛根素;高效液相色譜DeterminationofPuerarininGegenQinlianPelletsbyHPLCHE
2、Xin-xin(ZhejiangProvinceTaizhouLuqiaoChineseMedicineHospital,Taizhou,Zhejiang318050,China)Abstract:ObjectiveToestablishaHPLCmethodfordeterminationofpuerarininGegenQinlianpellets.MethodChromatographiccolumn:Diamonsil?C18(250x4.6mm,5um);mobilephase:methanol~water(15:85);flowrate:1.0mL?minT;detect
3、ionwave1ength:250nm;columntemperature:30°C?ResuItPuerarinshowedagoodlinearrelationshipattherangeof2.0?50.0ug?mLT(r=0.9999).Theaveragerecoveryofpuerarinwas99.8%(RSD=1.03%)?ConclusionThismethodissimple,reliableandReproducible,canbeusedforqualitycontroloftheGegenQinlianpellets.Keywords:GegenQinlia
4、npellets;Puerarin;HPLC葛根苓連丸收載于2010版《中國藥典》一部,處方出自東漢醫(yī)圣張仲景《傷寒論》”葛根苓連湯”,由葛根、黃苓、黃連、炙甘草組成,具有解肌、清熱、止瀉止痢等功效。用于泄瀉痢疾、身熱煩渴、下痢臭穢;菌痢、腸炎等癥[1]。葛根素的含量測定已有報道[2-4],本文借鑒報道,建立高效液相色譜測定葛根苓連丸中葛根素含量的方法,簡便、準確、可靠,可用于葛根苓連丸中葛根素含量測定。1儀器與試藥1.1儀器Agilent1100液相色譜儀,包括G1311A四元泵,G1313A自動進樣器,G1322A脫氣機,G1314A紫外可見檢測器,G1316A柱溫箱(美國安捷倫
5、公司);島津UV-260紫外可見分光光度計(日本島津公司);CP225D型電子天平(德國Sartorius公司);SIGMAHSK1-18K高速冷凍離心機(德國Sigma公司);USC-512超聲器振蕩器(上海波龍公司);XW-80A渦旋混合器(上海醫(yī)科大學儀器廠);YB-1A真空恒溫干燥箱(天津金州科儀廠)。1.2試藥葛根苓連丸3批(批號:20101101,20110111,20110226,廣西壯族自治區(qū)花紅藥業(yè)股份有限公司);葛根素對照品(批號:110752-200912,中國藥品生物制品檢定所);甲醇為色譜純、水為重蒸水、其他試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱:
6、Diamons訂C18(250X4.6mm,5um);流動相:甲醇-水(15:85);流速:1mL/min;波長:250nm;柱溫:30°C;進樣量:20uL。2.2對照品溶液制備精密稱取葛根素對照品適量,用40%乙醇溶解,稀釋,搖勻。制成每1mL中含葛根素500ugo2.3供試品溶液制備取本品適量,研細,取約1.0mg,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入40%乙醇50mLo稱定重量,超聲處理(250V50Hz)40min,放冷,再稱定重量,用40%乙醇補足減失的重量,搖勻,經(jīng)0.45um微孔濾膜濾過,即得供試品溶液。2.4陰性對照品溶液制備按葛根苓連丸的處方,取除葛根外的所有藥材,
7、得葛根苓連丸陰性樣品,取陰性樣品l.Og,按”2.3供試品的制備”方法的陰性溶液。2.5方法學考察2.5.1方法專屬性按”2.1色譜條件”測定,結(jié)果表明理論板數(shù)按葛根素峰計算應不低于3000,見圖1。圖1葛根苓連丸中葛根素含量測定色譜圖注:A.陰性溶液;B.對照品溶液;C.樣品溶液;1?葛根素2.5.2線性關系精密吸取0.2、0.5、1.0、2.0、5.0mL,分別置50mL容量瓶中,稀釋至刻度。吸取20HL注入液相色譜儀,記錄峰面積,以濃度為X軸,峰面積