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《高脂高糖飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝組織TLR4和MyD88mRNA的表達(dá)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、高脂高糖飲食誘導(dǎo)的耳E酒精性脂肪性肝炎大鼠肝組織TLR4和MyD88mRNA的表達(dá)［摘要］目的探討Toll樣受體4(TLR4)、髓樣分化因子88(MyD88)在高脂高糖飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝組織中的表達(dá)及其意義。方法選取SD大鼠20只，隨機(jī)分為兩組，模型組SD大鼠給予高脂高糖飼料喂養(yǎng)，正常組給予普通飼料喂養(yǎng)，10周末分別進(jìn)行如下檢測(cè)：①計(jì)算肝指數(shù)；②HE染色，光鏡下觀察各組大鼠肝組織的病理改變;③應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)大鼠肝組織TLR4、MyD88mRNA的表達(dá)。結(jié)果模型組的肝指數(shù)較正常組明顯增加(P<0.
2、01);模型組的NAFLD活動(dòng)度計(jì)分與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);模型組大鼠肝組織TLR4和MyD88的mRNA表達(dá)水平與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論持續(xù)10周的高脂高糖飲食喂養(yǎng)可以誘導(dǎo)NAFLD大鼠模型，模型組大鼠肝組織TLR4mRNA和MyD88mRNA表達(dá)升高，在肝細(xì)胞炎癥改變中起重要作用。［關(guān)鍵詞］非酒精性脂肪肝；大鼠；Toll樣受體4;髓樣分化因子88近年來(lái)非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholicfattyliverdisease,NAFLD)的發(fā)病率逐漸升高,且呈年輕化趨勢(shì)。胡衛(wèi)等
3、［1］對(duì)武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院教職工體檢的調(diào)查硏究發(fā)現(xiàn)，NAFLD總患病率達(dá)到20.7%，其具體發(fā)病機(jī)制尚未完全明確,但大量研究表明胰島素抵抗、炎癥反應(yīng)、脂質(zhì)代謝異常在該病的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用［2］。目前硏究表明,Toll樣受體(Tolllikereceptor,TLR)與感染信號(hào)的識(shí)別及轉(zhuǎn)導(dǎo)和機(jī)體的損傷密切相關(guān),將感染和炎癥、組織損傷聯(lián)系起來(lái)［引。Toll樣受體4(Tolllikereceptor4ZTLR4)是內(nèi)毒素識(shí)別受體,目前已知TLR4介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)包括髓樣分化因子88(myeloiddifferentiationfactor
4、88,MyD88)依賴性和非依賴性途徑。MyD88依賴性途徑主要介導(dǎo)核因子?kB(nuclearfator-KB,NF?kB)活化、細(xì)胞因子的產(chǎn)生［4］。本文通過(guò)硏究TLR4、MyD88在高脂高糖飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholicsteatohepatitis,NASH)大鼠肝組織中的表達(dá)，旨在探討TLR4、MyD88在NASH炎癥反應(yīng)中的作用。1材料與方法1.1非酒精性脂肪性肝炎動(dòng)物模型的建立健康雄性Spraque-Dawley大鼠20只，體重180~225g,清潔級(jí)z購(gòu)買于上海斯菜克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司［許可證
5、號(hào):SCXK(滬)2008-0016］,飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。20只SD大鼠隨機(jī)分為正常組(予普通飼料喂養(yǎng))10只及模型組10只(予以高脂高糖飼料喂養(yǎng))；于第10周處死正常組10只大鼠及模型組10只大鼠，HE染色，光鏡下觀察正常組和模型組大鼠肝組織的病理改變，以證實(shí)大鼠非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholicsteatohepatitis,NASH)模型成功建立。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物每籠5只，分籠飼養(yǎng)，均自由飲水和進(jìn)食，(20±2)°C明暗各12h,均連續(xù)10周。1.2標(biāo)本采集第10周末當(dāng)晚兩組大鼠禁食不禁水，次日晨空腹腹腔注
6、射麻醉z心臟采血用于測(cè)走生化指標(biāo)和細(xì)胞因子；分離整個(gè)肝臟稱重，在肝右葉切取數(shù)塊肝組織,裝入凍存管,投入液氮中保存,進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后移入￡0工冰箱中保存z用于提取總RNAz以檢測(cè)肝組織中TLR4、MyD88的mRNA表達(dá)。1.3病理組織學(xué)檢查常規(guī)HE染色，光鏡下觀察大鼠肝細(xì)胞脂肪變性程度、氣球樣變性、小葉內(nèi)炎癥程度以評(píng)定NAFLD活動(dòng)度計(jì)分（NAFLDactivityscorezNAS）z脂肪肝病理組織學(xué)診斷參考中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝臟病學(xué)分會(huì)脂肪肝和酒精性肝病學(xué)組〃非酒精性脂肪肝診斷標(biāo)準(zhǔn)〃⑸。根據(jù)肝小葉內(nèi)脂肪變的肝細(xì)胞數(shù)將脂變程度量化:0分（肝小
7、葉內(nèi)＜5%肝細(xì)胞脂肪變）、1分（肝小葉內(nèi)5%~33%肝細(xì)胞脂肪變）、2分（肝小葉內(nèi)34%~66%肝細(xì)胞脂肪變）、3分（肝小葉內(nèi)〉66%肝細(xì)胞脂肪變）。肝小葉內(nèi)炎癥（20倍鏡計(jì)數(shù)壞死灶）計(jì)分：0分（無(wú)壞死灶）、1分（＜2個(gè)壞死灶）、2分（2~4個(gè)壞死灶）、3分（＞4個(gè)壞死灶）。肝細(xì)胞氣球樣變程度計(jì)分：0分（無(wú)氣球樣變）、1分（少見(jiàn)氣球樣變）、2分（多見(jiàn)氣球樣變）。NAFLD活動(dòng)度計(jì)分（NAFLDactivityscore,NAS）為肝細(xì)胞脂肪變+小葉內(nèi)炎癥+肝細(xì)胞氣球樣變，NAS小于3分則不考慮NASH,NAS大于4分則可診斷NASH
8、z介于兩者之間為NASH可能。1.4RT-PCR檢測(cè)TLR4、MyD88mRNA在NASH大鼠肝組織中的表達(dá)141總RNA提取從超低溫冰箱中取出冰凍的組織，約為100mg,迅速轉(zhuǎn)移至用液氮預(yù)冷的研缽中,用硏杵硏磨組織，直至硏磨成粉末狀
