細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物非臨床研究

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1、附件四細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則一.概述細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物是指能夠直接殺傷腫瘤細(xì)胞或抑制腫瘤細(xì)胞生長、增殖的一類化療藥物，作用機(jī)制包括抑制腫瘤細(xì)胞核酸或蛋白質(zhì)的合成、干擾大分子物質(zhì)代謝、干擾微管系統(tǒng)、抑制拓?fù)洚悩?gòu)細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物是目前治療惡性腫瘤的主要手段之一。此類藥物在殺滅或抑制腫瘤細(xì)胞的同時，也會對機(jī)體的正常細(xì)胞（尤其是代謝旺盛的細(xì)胞）產(chǎn)生影響，通常在藥效劑量下就會導(dǎo)致病人出現(xiàn)不良反應(yīng)。此類藥物的上述特點(diǎn)決定了其非臨床研究與其他藥物相比，具有一定的特殊性。本指導(dǎo)原則僅代表目前對細(xì)胞

2、毒類抗腫瘤藥物非臨床研究的一般性認(rèn)識，旨在為細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物的非臨床研究提供技術(shù)指導(dǎo)和參考。由于指導(dǎo)原則不可能涵蓋細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物開發(fā)中的所有情況，所以具體藥物的非臨床研究應(yīng)在本指導(dǎo)原則的基礎(chǔ)上，根據(jù)藥物的自身特點(diǎn)制訂研究方案。本指導(dǎo)原則主要適用于創(chuàng)新性細(xì)胞毒類抗腫瘤化學(xué)藥物（見注釋1）,內(nèi)容重點(diǎn)闡述細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物非臨床研究的特殊性，凡與既往頒布指導(dǎo)原則內(nèi)容重復(fù)的部分，文中不再贅述，請參照有關(guān)指導(dǎo)原則執(zhí)行。二.有效性研究細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物有效性研究的目的主要是探索受試物的作用機(jī)制、作用強(qiáng)度以及對不同類型腫瘤的敏感性等，為安全性評價以

3、及臨床試驗中給藥方案、瘤種的選擇等提供參考信息。由于研究方法的局限性，目前細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物有效性研究的結(jié)果并不能準(zhǔn)確地預(yù)測受試物的臨床療效。注冊申請人應(yīng)充分意識到細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物有效性研究的不確定性，及其為藥物研發(fā)帶來的風(fēng)險。在有效性試驗中應(yīng)重視探索藥物的作用機(jī)制，使模型盡可能模擬臨床腫瘤病人的實際情況，以降低開發(fā)風(fēng)險。（一）體外試驗體外試驗主要用于篩選候選化合物，初步了解受試物的作用機(jī)制、敏感腫瘤類型和作用強(qiáng)度，為隨后進(jìn)行的體內(nèi)試驗提供參考。作用機(jī)制研究（如藥物作用靶點(diǎn)、細(xì)胞周期特異性等）對于預(yù)測受試物的有效性和安全性，完善非臨床和臨

4、床試驗的設(shè)計具有重要意義，此部分研究應(yīng)伴隨開發(fā)進(jìn)程不斷深入。對于創(chuàng)新性藥物，必要的作用機(jī)制研究資料應(yīng)在申請臨床試驗時提交。在體外培養(yǎng)的不同人腫瘤細(xì)胞系中加入不同濃度的受試物，采用磺酰羅丹明染色法（SRB法）、四氮瞠鹽還原法（MTT法）、集落形成法、臺盼蘭染色法等方法進(jìn)行檢測，計算受試物的半數(shù)抑制濃度（IC50）,并與陽性對照藥進(jìn)行比較，可初步預(yù)測受試物的作用強(qiáng)度和對不同類型腫瘤細(xì)胞的敏感性。應(yīng)根據(jù)受試物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、理化性質(zhì)和作用機(jī)制確定體外試驗采用的研究方法。例如，以線粒體為作用靶點(diǎn)的受試物不宜采用四氮瞠鹽還原法。在選擇腫瘤細(xì)胞系時應(yīng)考慮到

5、細(xì)胞的生長和增殖速率。除非有充分證據(jù)證明受試物僅作用于特定的人體細(xì)胞靶點(diǎn)，一般應(yīng)至少選用12種人癌細(xì)胞系進(jìn)行試驗。試驗還應(yīng)考察受試物對耐藥腫瘤細(xì)胞系和正常人源細(xì)胞的作用和影響。受試物與細(xì)胞共培養(yǎng)的時間一般為48?72小時，貼壁細(xì)胞需先貼壁24小時后再給藥。試驗應(yīng)設(shè)陽性和陰性對照組，陽性對照為化學(xué)結(jié)構(gòu)類似，具有相同或類似作用機(jī)制的抗腫瘤藥物，陰性對照為溶媒對照。試驗至少應(yīng)重復(fù)一次。(-)體內(nèi)試驗體內(nèi)試驗用于進(jìn)一步考察受試物對特定類型腫瘤細(xì)胞的殺傷或抑制作用，探索受試物產(chǎn)生藥效作用的給藥劑量、途徑、頻率和周期等。體內(nèi)試驗通常采用動物腫瘤移植模型

6、和人癌異體移植模型。由于動物腫瘤移植模型與臨床療效之間的相關(guān)性不強(qiáng)，僅可用于候選化合物的初步篩選。通常情況下，以人癌異體移植模型試驗結(jié)果來評價細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物的有效性。1、模型建立人癌異體移植模型試驗通常在無胸腺鼠或聯(lián)合免疫缺陷小鼠體內(nèi)移植人癌細(xì)胞系，觀察受試物對腫瘤生長的抑制作用。移植腫瘤的選擇主要參考體外試驗結(jié)果、細(xì)胞系的生物學(xué)特點(diǎn)等因素。原則上，應(yīng)盡量選用多種人癌異體移植瘤模型；移植的人癌細(xì)胞系在組織學(xué)、基因表達(dá)特點(diǎn)、耐藥性等方面應(yīng)與人體腫瘤盡量接近。細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物臨床前體內(nèi)試驗一般至少應(yīng)選用3?4種人癌異體移植瘤模型，試驗至少

7、應(yīng)重復(fù)一次。人癌細(xì)胞系移植成瘤后，應(yīng)傳2?3代后再用于體內(nèi)抗腫瘤試驗。為了保持移植瘤的生物學(xué)特性和遺傳特性，移植瘤體內(nèi)傳代應(yīng)少于15?20代。2.試驗設(shè)計腫瘤移植部位主要在皮下，也包括原位和腹腔等。通常待移植腫瘤生長至少達(dá)lOOmn?后，再將動物隨機(jī)分組給藥。一般包括高、中、低3個劑量的給藥組、陽性對照組和陰性對照組。每組至少6只動物。給藥組受試物劑量的選擇應(yīng)體現(xiàn)出量效關(guān)系，高劑量不宜超過受試物的最大耐受量（見注釋2）。應(yīng)根據(jù)受試物的藥動學(xué)特點(diǎn)和毒性反應(yīng)等確定給藥頻率和周期；給藥途徑盡量與推薦臨床用藥的途徑相同。陽性對照藥一般需滿足以下條件

8、：（1）與受試物結(jié)構(gòu)類似，作用機(jī)制相同或相近；（2）對移植腫瘤敏感；（3）臨床廣泛應(yīng)用且療效確切。陽性對照藥的給藥方案應(yīng)體現(xiàn)出最佳治療作用,其劑量一般不宜超過最大耐受量。陰性對照