端粒酶活性在卵巢腫瘤組織中表達(dá)的臨床意義

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1、端粒酶活性在卵巢腫瘤組織中表達(dá)的臨床意義西北國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志2000年第21卷第4期楊秀芝陳必良蘇明權(quán)辛?xí)匝嗤醯绿谜耗康模貉芯繙y(cè)定端粒酶活性在診斷和預(yù)測(cè)卵巢腫瘤方面的意義。方法：應(yīng)用PCR-TRAP法檢測(cè)30例卵巢腫瘤組織(良性組織8例，交界性或低度惡性腫瘤7例惡性腫瘤15例)的端粒酶活性。結(jié)果：8例卵巢良性組織中均未測(cè)出端粒酶活性,7例卵巢交界性或低度惡性腫瘤組織中,4例(57%)端粒酶活性陽(yáng)性表達(dá)，15例卵巢惡性腫瘤組織中,14例(93.3%)端粒酶活性陽(yáng)性表達(dá)。卵巢上皮性惡性腫瘤組織中，在組織類型、組織學(xué)分級(jí)及腫瘤分期Z

2、間無(wú)顯著性差異。結(jié)論：端粒酶活性的檢測(cè)不僅有助于卵巢腫瘤的診斷和鑒別診斷，且有助于預(yù)測(cè)患者的預(yù)后。關(guān)鍵詞：卵巢腫瘤；端粒酶活性；表達(dá)無(wú)限增殖是癌細(xì)胞的重要生物學(xué)特性。研究發(fā)現(xiàn)端粒臨與細(xì)胞分裂及壽命控制有密切關(guān)系，在細(xì)胞癌變?cè)缙谟捎诙肆Ｃ傅幕钚栽鰪?qiáng)，致使端粒的長(zhǎng)度得以維持，細(xì)胞染色體形態(tài)得到穩(wěn)定，從而逃避了因端粒縮短而引起的細(xì)胞死亡，使細(xì)胞獲得永生化［1］。端粒酶活性在人體多數(shù)腫瘤紐織中均獲檢出。我們采用端粒重復(fù)擴(kuò)增PCR(PCR-TRAP)方法對(duì)我院30例卵巢腫瘤組織進(jìn)行端粒酶活性檢測(cè)，了解端粒酶活性在卵巢腫瘤組織中的表達(dá)及在

3、診斷和預(yù)測(cè)卵巢腫瘤預(yù)后方而的意義。1材料和方法1.1材料1.I.1組織標(biāo)本來(lái)源：30例卵巢腫瘤組織均為我院1999-03?09手術(shù)切除標(biāo)本，包括8例卵巢良性腫瘤，7例交界性腫瘤，15例惡性腫瘤。所有病例均經(jīng)病理學(xué)證實(shí)。獲取的新鮮組織標(biāo)木立即置一20°C凍存。1.1.2端粒酶檢測(cè)試劑：由Oncor公司提供。1.2方法1.2.1端粒酶的提取：手術(shù)切除的卵巢腫瘤組織5()mg,置液氮速凍后用組織研磨器研成粉末，PBS緩沖液洗滌一次，10000g?min-l離心1min,棄洗液，加入100u1預(yù)冷的裂解液(10mmol?L—1tris

4、—HCLpH7.5;lmmol?L~1EGTA；lmmol?L—1二蔬基乙醇：0.5%CHAPS；10%廿油5),混合后冰浴裂解30min,12000g-min一14°C離心20min,上清即為端粒酶提取物，或一20°C保存?zhèn)浯ā?.2.2PCR擴(kuò)增：PCR反應(yīng)總體積為50U1,包括10XTRAP反應(yīng)液5.0u1,2.5mmol?L-1dNTPsmix1.0u1,Ts引物1.0u1,TaqdNA聚合酶2U,端粒酶提取物2.0u1,無(wú)菌石蠟油30Pl,離心片刻，置30°C反應(yīng)30min后，加CX引物1.0U1,進(jìn)入PCR循環(huán)，循

5、壞條件為：94°C3min-*94°C30s-*48°C30s->72°C30s,35次循壞，最后72°C延伸5mine1.2.3產(chǎn)物的檢測(cè)：取PCR擴(kuò)增產(chǎn)物15u1,于10%非變性聚丙烯酰胺凝膠200V電泳90min,將凝膠小心取出置T*0.1Pg?ml—1的EB液中染色15min,再用蒸錨水漂洗兩次，紫外燈下觀察結(jié)果并拍照。反應(yīng)以TSR8陽(yáng)性模板為陽(yáng)性對(duì)照，含36bp的內(nèi)對(duì)照(Oncor公司),IXCHAPS裂解液代替組織裂解液為空白対照，每一樣品均設(shè)立端粒酶熱失活對(duì)照(PCr-TRAP反應(yīng)前將細(xì)胞裂解物于85°C處理15

6、min,使端粒酶失活)。1.2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采川x2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。2結(jié)果2.1卵巢腫瘤紐織中端粒酶活性的表達(dá)：8例卵巢良性腫瘤組織中：包括卵巢粘液性囊腺瘤2例，卵巢漿液性囊腺瘤2例，卵巢血管平滑肌瘤2例，卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫2例，端粒酶活性均呈陰性。在7例交界性或低度惡性卵巢腫瘤組織中，包括2例交界性粘液性囊腺瘤，2例交界性漿液性囊腺瘤，2例支持細(xì)胞瘤，1例粒層細(xì)胞卵泡膜細(xì)胞瘤，4例端粒酶陽(yáng)性表達(dá)，3例端粒酶為陰性。在15例卵巢惡性腫瘤組織屮，包括卵巢漿液性愛(ài)腺癌6例，粘液性囊腺癌2例，子宮內(nèi)膜樣癌4例，惡性畸胎瘤1例

7、，轉(zhuǎn)移性癌2例，14例端粒酶活性陽(yáng)性表達(dá)，1例端粒酶活性為陰性。結(jié)果見(jiàn)表1。衣1卵巢腫瘤組織中端粒酚活性表達(dá)腫瘤例數(shù)陽(yáng)性例數(shù)陰性例數(shù)陽(yáng)性率(％)良性8080交界性74357.0惡性1514193.3注：comparedtobenign:P<0.051.2端粒酶活性與腫瘤組織學(xué)的關(guān)系：雖然我們的方法是端粒酶活性的定性檢測(cè)，但發(fā)現(xiàn)卵巢惡性腫瘤的端粒酶活性與腫瘤的組織類型、組織分級(jí)、腫瘤分期無(wú)明顯的相關(guān)性。3討論向1994年Kim［2］建立了高效敏感的以PCR為基礎(chǔ)的端粒重復(fù)擴(kuò)增(TRAP)方法以來(lái),端粒酶引起了人們的廣泛關(guān)注。近年

8、文獻(xiàn)報(bào)道，絕大部分腫瘤呈端粒臨酶陽(yáng)性，而在鄰近止常人體組織細(xì)胞或良性腫瘤則為陰性［3］,在惡性腫瘤針吸標(biāo)本、尿液、腸道沖洗液屮，端粒酶活性的檢測(cè)也有較高的表達(dá)，有助于腫瘤的早期診斷［4］。Hiyama等［5］對(duì)乳腺癌、胃癌病人的研究發(fā)現(xiàn)，端粒酶陽(yáng)性者腫瘤體積人，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高