乳酸環(huán)丙沙星對鯉魚腸道菌群的影響

《乳酸環(huán)丙沙星對鯉魚腸道菌群的影響》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。

1、乳酸環(huán)丙沙星對鯉魚腸道菌群的影響11＊2211楊雨輝佟恒敏盧彤巖趙吉偉李曉霞王君（1．東北農(nóng)業(yè)大學(xué)1500302．中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所150076）本文采用常規(guī)細(xì)菌的鑒定方法，研究了乳酸環(huán)丙沙星對鯉魚腸道菌群的影響，結(jié)果表明鯉魚經(jīng)口灌服乳酸環(huán)丙沙星前后，細(xì)菌的數(shù)量和組成比例都發(fā)生了明顯的改變。鯉魚在應(yīng)用68乳酸環(huán)丙沙星前，腸道前、中、后腸段的細(xì)菌數(shù)量為10-10CFU/g，經(jīng)口灌服乳酸環(huán)丙沙星后腸道細(xì)菌的數(shù)量減少，并且組成比例也發(fā)生了改變，用藥后120h細(xì)菌的組成比例尚未完全恢復(fù)到用藥前的水平，腸

2、道內(nèi)細(xì)菌的變化情況主要為，腸道前、中、后腸段的氣單胞菌屬的比例都明顯下降，其它的細(xì)菌比例明顯升高，而且出現(xiàn)有些種屬的細(xì)菌在用藥后不能檢出的現(xiàn)象。這些結(jié)果表明乳酸環(huán)丙沙星應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖后，容易導(dǎo)致水產(chǎn)動物腸道菌群的失衡，且恢復(fù)到用藥前的水平較慢。關(guān)鍵詞：乳酸環(huán)丙沙星腸道菌群鯉魚[1]研究表明，在正常情況下魚類腸道內(nèi)存在著大量的細(xì)菌群落，這些細(xì)菌群落是動物長[2][3,4]期進(jìn)化的結(jié)果，它們和動物的免疫功能、營養(yǎng)需求都有著及其密切的關(guān)系。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中，由于魚病的發(fā)生而造成許多重大的經(jīng)濟(jì)損失，為了減少這種損失，各種抗

3、菌藥物被大量的使用，但是如果這些藥物不被科學(xué)合理的應(yīng)用，往往就會造成被應(yīng)用動物的腸道菌群失衡，而引起新的疾病。由于抗菌藥物的不合理應(yīng)用造成腸道疾病的病例在人醫(yī)和獸醫(yī)上已有[5,6]不少文獻(xiàn)的報道。乳酸環(huán)丙沙星是第三代喹諾酮類藥物，目前已被廣泛應(yīng)用于人醫(yī)和獸醫(yī)臨床，并且也被應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖作為治療魚類細(xì)菌性感染的藥物，但是有關(guān)該藥對魚類腸道菌群的影響在國內(nèi)外還未見報道。本研究以鯉魚為模型動物，檢驗(yàn)了鯉魚經(jīng)口灌服乳酸環(huán)丙沙星后腸道內(nèi)好氧及兼性厭氧菌群的種群和數(shù)量的變化，旨在為評價該種藥物應(yīng)用于水產(chǎn)動物后對腸道菌群的影

4、響，同時為評價該藥應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖是否科學(xué)提供理論參考。1材料與方法1.1乳酸環(huán)丙沙星原粉含量98.5%，批號010914，浙江新昌縣康樂獸藥有限公司生產(chǎn)。1.2實(shí)驗(yàn)魚及飼養(yǎng)管理本實(shí)驗(yàn)所用的鯉魚魚種由黑龍江水產(chǎn)研究所良種試驗(yàn)場提供，選擇體質(zhì)健壯，體重150±20g的鯉魚，在室內(nèi)暫養(yǎng)一周，每天按魚體重的2%投喂飼料，水溫保持在18-22℃，試驗(yàn)期間不投喂飼料。1.3藥物投喂及試樣的采集將乳酸環(huán)丙沙星用雙重純化水溶解成7.5mg/ml的水溶液，用塑料軟管強(qiáng)制灌入鯉魚的食道，劑量為10mg/kg.b.w，然后分別在灌服

5、乳酸環(huán)丙沙星藥液后4、8、12、24、48、72、96和120h后取樣。鯉魚體表用75%的酒精棉球消毒，打開腹腔，用棉線分別結(jié)扎食道、肛門和各段腸的交界處，再用剪刀分離各腸段，無菌水沖洗數(shù)遍后，剪碎，稱取大約0.2g組織，加入50倍的滅菌生理鹽水，勻漿，制成原液，每個時間點(diǎn)采取5尾魚。4試劑及培養(yǎng)基的制作1.4.1分離培養(yǎng)基的制作＊通訊作者采用吉水等（1976）介紹的淡水魚類瓊脂培養(yǎng)基（FWA），略做修改，準(zhǔn)確稱取硫酸鎂0.05g、牛肉粉2.50g，磷酸氫二鉀0.20g，葡萄糖1.00g，蛋白胨5.00g，氯化

6、鈉5.00g，酵母粉2.50g，瓊脂粉17g，加水1000ml，用氫氧化鈉調(diào)整pH至7.2-7.4，121℃，高壓滅菌20min后備用。1.4.2鑒別用試劑和培養(yǎng)基的制作革蘭氏染液的配置、氧化酶試紙的制作、葡萄糖發(fā)酵產(chǎn)氣培養(yǎng)基、運(yùn)動性試驗(yàn)培養(yǎng)基、肌醇利用培養(yǎng)基、需鈉試驗(yàn)用培養(yǎng)基的制作[7，8]。1.5細(xì)菌計數(shù)將各段腸原液做10倍系列稀釋，在FWA培養(yǎng)基平板上涂布，于30℃下培養(yǎng)24-48h后計數(shù)，并換算成每克腸所含的細(xì)菌數(shù)量。1.6細(xì)菌的鑒定在每個時間點(diǎn)的5尾魚中隨機(jī)選擇三尾魚的腸道菌進(jìn)行細(xì)菌鑒定，在各腸段細(xì)菌

7、的分離板中，選擇菌落清晰、分散而且菌落數(shù)在30-300之間的平板，隨機(jī)地挑取30個菌落，用FWA培養(yǎng)基進(jìn)行純培養(yǎng)后，置4℃冰箱中保存，供細(xì)菌鑒定之用。菌種的鑒定參照《一般[7][9]細(xì)菌常用鑒定方法》和周文豪的方法進(jìn)行,對于個別本方法不能鑒定的細(xì)菌則不列入本研究的討論范圍。2結(jié)果2.1鯉魚經(jīng)口灌服乳酸環(huán)丙沙星前后腸道細(xì)菌數(shù)量的變化及恢復(fù)灌服乳酸環(huán)丙沙星前后，鯉魚腸道細(xì)菌數(shù)量（用每克組織細(xì)菌數(shù)量的對數(shù)值lgCFU/g表示）的變化如表1所示。未灌服乳酸環(huán)丙沙星的對照組的前、中、后腸段的細(xì)菌數(shù)量的對數(shù)值分別為6.20

8、1±0.165、7.134±0.329和8.437±0.227。灌服乳酸環(huán)丙沙星后，前、中、后腸的細(xì)菌數(shù)量都呈減少的趨勢，中腸、后腸的前24h各時間點(diǎn)的細(xì)菌數(shù)量和對照組的中、后腸細(xì)菌數(shù)量都存在著顯著的差異（P<0.05），在用藥后24-48h后細(xì)菌數(shù)量恢復(fù)到未用藥前的水平，但前腸各時間點(diǎn)的細(xì)菌數(shù)量和對照組的細(xì)菌數(shù)量之間沒有顯著差異（P<0.05），即乳酸環(huán)丙沙星對鯉魚的前腸細(xì)菌數(shù)量沒有