甾體激素類(lèi)藥物分析

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1、第十章甾體激素類(lèi)藥物的分析第一節(jié)基本結(jié)構(gòu)與分類(lèi)一、分類(lèi)二、結(jié)構(gòu)分析甾體激素的基本骨架ABCD1.腎上腺皮質(zhì)激素A2.雄性激素和蛋白同化激素3.孕激素4.雌激素A環(huán)為苯環(huán)，C3位有酚羥基C3位有酚羥基A環(huán)為苯環(huán)口服避孕藥第二節(jié)鑒別試驗(yàn)一、化學(xué)鑒別法1.與強(qiáng)酸的呈色反應(yīng)母核反應(yīng)常用與硫酸的呈色反應(yīng)醋酸潑尼松Ch.P（2005）【鑒別】（2）取本品約5mg，加硫酸1ml使溶解，放置5分鐘，即顯橙色；將此溶液傾入10ml水中，即變成黃色，漸漸變?yōu)樗{(lán)綠色。2.官能團(tuán)的反應(yīng)（1）酮基的呈色反應(yīng)黃體酮Ch.P（2005）【鑒別】取本品約0.5mg，置小試管中

2、，加異煙肼約1mg與甲醇1ml溶解后，加稀鹽酸1滴，即顯黃色。（2）C17位?—醇酮基的反應(yīng)還原性腎上腺皮質(zhì)激素+堿性酒石酸銅→Cu2O↓（紅色）醋酸潑尼松Ch.P（2005）【鑒別】（1）取本品約1mg，加乙醇2ml使溶解，加10%氫氧化鈉溶液2滴與氯化三苯四氮唑試液1ml，即顯紅色。醋酸去氧皮質(zhì)酮Ch.P（2005）【鑒別】（1）取本品約5mg，加乙醇0.5ml溶解后，加氨制硝酸銀試液0.5ml，即生成黑色沉淀。倍他米松Ch.P（2005）【鑒別】（1）取本品約10mg，加甲醇1ml，微熱溶解后，加熱的堿性灑石酸銅試液1ml，生成磚紅色沉淀

3、。（4）酚羥基的呈色反應(yīng)（3）甲酮基的呈色反應(yīng)雌激素＋重氮苯磺酸→紅色（5）炔基的沉淀反應(yīng)白色炔銀↓（6）鹵素的反應(yīng)地塞米松磷酸鈉Ch.P（2005）【鑒別】（3）本品顯有機(jī)氟化物的鑒別反應(yīng)（附錄Ⅲ）醋酸酯→醋酸→乙酸乙酯（香氣）戊酸酯→戊酸（臭氣）己酸酯→己酸（臭氣）（7）酯的反應(yīng)—水解產(chǎn)物的反應(yīng)醋酸地塞米松Ch.P（2005）【鑒別】（2）取本品50mg，加乙醇制氫氧化鉀試液2ml，置水浴中加熱5分鐘，放冷，加硫酸溶液（1→2）2ml，緩緩煮沸1分鐘，即發(fā)生乙酸乙酯的香氣。己酸羥孕酮Ch.P（2000）【鑒別】（2）取本品約50mg，加醇制

4、氫氧化鉀試液2ml，置水浴中加熱5分鐘，加水3ml，蒸去乙醇，放冷，加硫酸溶液（1→10）2ml，置水浴中加熱，即發(fā)生己酸的特臭.（二）制備衍生物測(cè)定熔點(diǎn)（四）UV（五）IR（六）TLC（七）HPLC第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查一、有關(guān)物質(zhì)（其他甾體）的檢查甾體激素類(lèi)藥物多由其他甾體化合物經(jīng)結(jié)構(gòu)改造而來(lái)，易引入與標(biāo)示甾體激素藥物結(jié)構(gòu)不同、生理活性不同的其他甾體化合物稱(chēng)為“有關(guān)物質(zhì)”，包括原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物等1.HPLCCh.P（2005）一般采用不加校正因子的主成分自身對(duì)照法2.TLCCh.P（2000）高低濃度對(duì)比法二、游離磷酸鹽的檢查地塞

5、米松磷酸鈉分光光度法三、有機(jī)溶劑殘留量的檢查GC地塞米松磷酸鈉檢查甲醇和丙酮以正丙醇為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，規(guī)定含丙酮不得過(guò)5.0%，且不得出現(xiàn)甲醇峰。四、硒的檢查第四節(jié)含量測(cè)定一、HPLC90%以上的本類(lèi)藥物用此法反相高效液相色譜法，內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法定量二、紫外分光光度法具有△4—3—酮基的腎上腺皮質(zhì)激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素在240nm附近有最大吸收。具有苯環(huán)的雌激素在280nm附近有最大吸收。原料、注射劑用一定的溶劑溶解或稀釋后直接測(cè)定；片劑用一定的溶劑提取、濾過(guò)，取續(xù)濾液測(cè)定。若有“其他甾體”的干擾，可用色譜法（柱色譜和薄層色譜）分離后再行

6、紫外法測(cè)定Ch.P（2005）醋酸潑尼松龍片取本品20片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量（約相當(dāng)于醋酸潑尼松龍20mg），置100ml量瓶中，加無(wú)水乙醇約60ml，振搖15分鐘使醋酸潑尼松龍溶解，加無(wú)水乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5ml，置另一100ml量瓶中，再用無(wú)水乙醇稀釋至刻度，搖勻，照紫外-可見(jiàn)分光光度法（附錄ⅣA），在243nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，按C23H30O6的吸收系數(shù)為370計(jì)算，即得。三、四氮唑比色法1.原理皮質(zhì)激素C17-?-醇酮基具有還原性，在強(qiáng)堿性溶液中能將四氮唑鹽定量地還原為有色的產(chǎn)物。生成的顏色隨所用試劑和

7、條件的不同而不同。2.常用的四氮唑鹽（1）氯化三苯四氮唑（TTC）即紅四氮唑（RT）（2）藍(lán)四氮唑（BT）3.測(cè)定方法醋酸去氧皮質(zhì)酮Ch.P（2005）【含量測(cè)定】取本品適量，精密稱(chēng)定，加無(wú)醛乙醇溶解并定量稀釋制成每1ml中約含35mg的溶液，精密量取10ml，置25ml量瓶中，加氯化三苯四氮唑試液2ml，在氮?dú)饬飨?，迅速加入氫氧化四甲基銨試液2ml，通氮?dú)夂?，密塞，搖勻，于30℃水浴中放置1小時(shí)，迅速冷卻。用無(wú)醛乙醇稀釋至刻度，搖勻，照紫外-可見(jiàn)分光光度法（附錄ⅣA），在485nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度；另取醋酸去氧皮質(zhì)酮對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定

8、，同法測(cè)定，計(jì)算，即得。4.討論（1）基團(tuán)的影響（2）溶劑和水分的影響無(wú)醛無(wú)水乙醇作溶劑（3）堿的種類(lèi)及加入順序的影響先加四氮唑鹽溶液，后加氫氧化四甲