HSCCC分離體系的篩選與影響因子

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1、高速逆流色譜儀的應(yīng)用——體系的篩選及其影響因素TOPICS:HSCCC概念體系篩選的主要參數(shù)K值的測定方法分離的影響因素體系的選擇方法具體實例小結(jié)高速逆流色譜（HSCCC）是利用螺旋柱在行星運動時產(chǎn)生的離心力，使互不相溶的兩項不斷混合，同時保留其中的一相（固定相），利用恒流泵連續(xù)輸入另一相（流動相），隨流動相進(jìn)入螺旋柱的溶質(zhì)在兩相之間反復(fù)分配，按分配系數(shù)的次序，被依次洗脫。在流動相中分配比例大的先被洗脫，在固定相中分配比例大的后被洗脫。與傳統(tǒng)色譜相比，它是液液分配的，動態(tài)的，多維力場的分離方法。HSCCC主要參數(shù)影響HSCCC體系的分離效果的主要參數(shù)

2、K待分離樣品的不同成分在上下相中的溶解度的分配比K＝Cs/Cm理想的分配比值k=0.67~1.5CsCm兩種溶質(zhì)分離因子：α＝K1/K2測定方法如何測定K值？▲利用分光光度計▲利用TLC▲利用HPLC▲利用生物活性分配比率法◆固定相保留率◆轉(zhuǎn)速及流速◆溫度◆pH值◆進(jìn)樣量當(dāng)體系選定后，在適當(dāng)合理的調(diào)節(jié)這些因素，樣品可以達(dá)到有效的分離。分離的影響因素◆固定相保留率直接決定分離柱的有效長度，合適的范圍為30％～80％。在一定范圍內(nèi)，保留率越高，分離越好?！艮D(zhuǎn)速及流速不同的機(jī)型可選擇不同的轉(zhuǎn)速及流速。在一定范圍內(nèi)，轉(zhuǎn)速提高，保留增加；流速降低，保留增加?！?/p>

3、溫度不同的樣品及不同的體系，溫度的影響可能都會不一樣。可配置恒溫裝置，控制實驗因素。◆pH值可通過調(diào)節(jié)體系的PH值使樣品的溶解度達(dá)到合適的范圍?！暨M(jìn)樣量進(jìn)樣量的大小及溶樣體積多少的影響選擇方法一、經(jīng)典體系二、參考文獻(xiàn)三、自選體系四、體系的調(diào)節(jié)五、常見體系組合一、經(jīng)典體系正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水（1－1－1－1）正己烷－甲醇－水（1－1－1）氯仿－甲醇－水（4－3－2）文獻(xiàn)：銀杏黃酮類有效成分的分離溶劑系統(tǒng):氯仿-甲醇-水(4:3:2)流速:2ml/min轉(zhuǎn)速:900rpm分離溫度:26?CACB二、參考文獻(xiàn)參考與目標(biāo)成分相類似的成分的分離，確定初分

4、體系的組分及比例。文獻(xiàn)：葛根素(黃酮苷)乙酸乙酯－正丁醇－水（2－1－3）小檗堿(生物堿)氯仿－甲醇－0.1mol/LHCl（2－1－1）紫杉醇(萜類)正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水（1－1－1－1）三、自選體系在選擇之前，清楚了解目標(biāo)成分的性質(zhì)。目標(biāo)成分的性質(zhì)對體系的選擇很重要，如它的溶解度、極性、分子結(jié)構(gòu)等。蒽醌類易溶于氯仿、乙酸乙酯、乙醇、甲醇苷類易溶于正丁醇、乙醇、甲醇、水在研究的任一階段都可進(jìn)行自選體系的摸索。重點是：體系組成和各組分比例。根據(jù)樣品在各種溶劑中的溶解性來確定組分，然后通過測K值觀察樣品在上下相中的溶解度變化來確定比例。例如：揮發(fā)

5、油類性質(zhì)：易溶于石油醚、正己烷，溶于甲醇、乙醇，不溶于水組分可選擇：石油醚－甲醇－水石油醚－乙酸乙酯－甲醇－水組分比例可通過測K值，確定比例是1－1－1或4－3－1，從而初步篩選出體系四、體系的調(diào)節(jié)1、兩個方向（一）增加（或減少）目標(biāo)成分在固定相中的溶解度（二）減少（或增加）目標(biāo)成分在流動相中的溶解度2、具體調(diào)整方法（一）微調(diào)體系比例如：氯仿－甲醇－水（4－3－2）微調(diào)比例：3.5－3－2或4－3－1.5（二）增加（或減少）某一組分如：四氯化碳－氯仿－甲醇－水（1－4－3－2）（三）替換某一組分如：四氯化碳－甲醇醇－水（4－3－2）五、常見體系組合小

6、極性正己烷－甲醇石油醚－甲醇－水正庚烷－乙腈－二氯甲烷正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水中等極性氯仿－甲醇－水正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水大極性乙酸乙酯－丁醇－水氯仿－甲醇－丁醇－水具體實例實例1分離金銀花中的綠原酸結(jié)構(gòu)式：分析：有機(jī)酸，溶于乙酸乙酯、丁醇，易溶于甲醇、乙醇、水組分可選擇：氯仿－甲醇－水；正丁醇－乙酸乙酯－水初步判斷：大極性現(xiàn)選定它們的比例分別為5－6－4；4－1－5，測定以上體系的K值，分別為15，0.075。分析K值較小，考慮到樣品為有機(jī)酸，以正丁醇－乙酸乙酯－水為基準(zhǔn)調(diào)節(jié)，將乙酸乙酯替換為乙酸，經(jīng)測定K值為2.09。上機(jī)，如圖實例2分離

7、大黃蒽醌類結(jié)構(gòu)式：分析：易溶于乙醚、乙酸乙酯、氯仿，溶于甲醇、乙醇，不溶于水組分可選擇：氯仿－甲醇－水；正己烷－甲醇－水；正己烷－乙酸乙酯－甲醇－水初步判斷：中等極性偏小現(xiàn)選定正己烷－甲醇－水體系，比例根據(jù)測定K值（1－1－1，2－1－1，1－1－2）情況，選定2－1－1上機(jī)實驗，結(jié)果如圖：100120140160120140160180200Absorbance(mV)Time(min)結(jié)果分析，流動相溶解度太大，固定相幾乎無溶解，增加一相，讓其在固定相中溶解增加，所以加入少量乙酸乙酯，比例調(diào)整為：10－1－5－5上機(jī)實驗，結(jié)果如圖：0100150

8、200260120140160180200IIIIIIAbsorbance(mV)Time(min)結(jié)果分析