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《葛根提取物樣品中總黃酮和葛根素含量的測定》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、葛根提取物樣品中總黃酮和葛根素含量的測定一、實驗背景介紹1.黃酮類化合物的定義、結構與分類黃酮類化合物是在植物中分布非常廣泛的一類天然產(chǎn)物。此類化合物多為黃色,且具有酮式羰基,故稱黃酮類化合物。1952年以前,黃酮類化合物主要是指基本母核為2-苯基色原酮的一系列化合物。81812'3'OO21'7274'63636'5'4545O峰帶II,220~280nmA環(huán)苯甲酰基系統(tǒng)O峰帶I,300~400nmB環(huán)桂皮?;到y(tǒng)色原酮2-苯基色原酮(黃酮)現(xiàn)在的黃酮類化合物則泛指兩個苯環(huán)(A與B環(huán))通過中央三碳鏈相互連接而成的一
2、類化合物。12''81'3O24'7636'5'54C6-C3-C6黃酮類化合物的苷元的結構類型根據(jù)三碳鏈氧化程度、B環(huán)(苯基)連接位置(2-位或3-位)以及三碳鏈是否構成環(huán)狀可分為黃酮、異黃酮、二氫黃酮、查爾酮、花色素、橙酮類、黃烷醇類等。2.葛根及其所含黃酮的功能介紹葛根為豆科植物野葛的干燥根,其味甘、辛、性平,既是中藥材又是營養(yǎng)豐富的食用原料。葛根是我國一種傳統(tǒng)中藥,對于葛根的藥用價值早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有記載,葛根具有解痙退熱、生津、透疹、升陽止瀉等功能。黃酮類化合物是葛根中的主要活性類成分之一,同其它大多數(shù)
3、黃酮類化合物相似,葛根黃酮類化合物也具有多種藥理功能,如改善血液循環(huán)、降血壓、降血糖、降血脂、抑制動脈硬化,抗心率失常,抗血小板聚集、抗腫瘤、抗缺氧與抗氧化等。此外,葛根目前己被衛(wèi)生部認定為藥食兩用的山地植物。葛根素是從葛根中所提取得到的一種異黃酮類化合物,是葛根總黃酮中的一種。實驗證明其有擴張心腦血管,降低心肌氧耗,改善心肌收縮功能和促進血液微循環(huán)作用,可用于治療冠心病、視網(wǎng)膜動、靜脈阻塞和突發(fā)性耳聾等微循環(huán)障礙病?;谏鲜鲲@著的藥用價值,對葛根提取物中總黃酮以及葛根素含量的測定具有重要的意義。二、實驗目的:1.了解
4、雙光束紫外可見分光光度計和高效液相色譜的基本結構,并掌握相應的基本操作2.能夠通過化合物的紫外光譜掃描曲線,選擇合適的測定波長3.掌握高效液相色譜法定性定量分析的基本原理4.學習葛根提取物中總黃酮和葛根素的測定方法三、實驗原理1.總黃酮含量的測定原理大多數(shù)黃酮類化合物分子中存在桂皮?;捅郊柞;M成的交叉共軛體系,其在200~400nm波長的區(qū)域內(nèi)存在兩個紫外吸收帶,即位于帶Ⅰ(300~400nm)和帶Ⅱ(240~280nm)。其中帶Ⅱ的吸收峰較強,是定量分析的重要依據(jù),可采用紫外分光光度法測定樣品中總黃酮類化合物的含
5、量。由于葛根素是葛根中含量較多且具有代表性的一種黃酮,因而常以其為參考標準來測定葛根及其附加產(chǎn)品中總黃酮的含量。2.葛根素含量的測定原理葛根提取物中的組份較多,具體到葛根素的測定,則首先應將其與其他組分分離開來再進行測定,而高效液相色譜法是天然產(chǎn)物分離分析的重要手段,可通過優(yōu)化色譜操作條件實現(xiàn)葛根素的分離和測定。根據(jù)色譜定性原理,即同一種物質(zhì)在相同色譜操作條件下的保留時間一致,通過與葛根素標準品保留時間的對比,來確定提取物色譜圖中的葛根素色譜峰。根據(jù)色譜定量分析的原理,即在相同的色譜操作條件下,色譜峰的峰面積與待測物質(zhì)
6、的濃度成正比,依此可測定葛根素系列標準溶液的峰面積,繪制標準曲線,再由提取物溶液中葛根素的峰面積求出相應的濃度,最終計算出提取物中葛根素的含量。四、主要儀器與試劑主要儀器:TU-1901型雙光束紫外可見分光光度計;ThermoFisherUltiMate3000高效液相色譜儀(配有UV檢測器和chromeleon色譜工作站),分析天平;超聲波清洗器。主要試劑:1.0mg/mL葛根素標準儲備液(體積比為30/70的乙醇水做溶劑);葛根提取物A;葛根提取物B;甲醇(色譜純);無水乙醇(分析純);超純水五、實驗步驟1.葛根提
7、取物中總黃酮含量的測定(1)精密量取0.20、0.40、0.60、0.80和1.00mL的葛根素標準儲備液至于100mL容量瓶中,用30%的乙醇水溶液稀釋至刻度,搖勻。(2)精密稱取10mg葛根提取物A,將其轉移至50mL的容量瓶中,用30%的乙醇水溶液稀釋至刻度,搖勻,之后再精密量取0.50mL溶液至于10mL容量瓶中,用30%的乙醇水溶液稀釋至刻度,搖勻,以上步驟平行三次。對葛根提取物B做相同處理。(3)用紫外分光光度計掃描葛根素標準樣品溶液的吸收曲線(濃度可隨機選?。_定最大吸收波長,然后采用定量測量的方式,測
8、定系列標準溶液的吸光度,繪制標準曲線。(4)測定步驟(2)中葛根提取物A和B最終稀釋樣品的吸光度,取平均值,再對比標準曲線圖,得出相應的濃度,最后分別計算兩種葛根提取物中總黃酮的含量。二、葛根提取物中葛根素的含量測定(1)精密量取0.20、0.40、0.60、0.80和1.00mL的葛根素標準儲備液至于10mL容量瓶中,用10%的