葛根總黃酮提取物的含量測定研究

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1、葛根總黃酮提取物的含量測定研究作者:李婷,鄭彩美,張彤,陶建生【摘要】  目的測定葛根提取物中有效成分葛根素及總黃酮的含量。方法采用高效液相色譜法對其中的葛根素進(jìn)行含量測定;采用紫外分光光度法對其中的總黃酮進(jìn)行含量測定。結(jié)果葛根素含量在0.017536~1.7536μg范圍時(shí)與峰面積呈良好線性關(guān)系(r=0.99997),加樣回收率為99.50%,RSD為1.36%;總黃酮的線性范圍為2.192~10.92μg·ml-1(r=0.99955),加樣回收率為100.69%,RSD為1.29%。結(jié)論所建立的分析

2、方法簡便、準(zhǔn)確、可靠,重復(fù)性好,可用于葛根提取物中葛根素和總黃酮的測定?!娟P(guān)鍵詞】葛根提取物;高效液相色譜法;紫外分光光度法  Abstract:ObjectiveTodeterminethecontentsofpuerarinandtotalflavonoidsinextractsofPuerarialabta(asilC18柱(4.6mm×250mm,5μm);流動相為甲醇-水(26∶74);流速1.0ml/min;柱溫30℃;檢測波長250nm;進(jìn)樣量20μl。按上述條件進(jìn)行含量測定,此條件下,葛根

3、素能與其它組分達(dá)到基線分離,與相鄰的色譜峰分離度大于1.5,保留時(shí)間適中。陰性對照溶液對其含量無干擾。葛根素峰理論塔板數(shù)均不小于3000。結(jié)果見圖1?! ?.1.2對照品貯備液配制精密稱取葛根素對照品5.48mg置25ml量瓶中,加30%乙醇使溶解并定容至刻度,濃度為219.2μg·ml-1,作為對照品貯備液?! ?.1.3供試品溶液配制取葛根總黃酮提取物約10mg,精密稱定,置10ml量瓶中,加入30%乙醇適量,溶解后定容。再從中精密吸取1ml置10ml量瓶中,以30%乙醇稀釋至刻度,搖勻,0.45μm

4、微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液,作為供試品溶液。  2.1.4空白溶液的制備取30%乙醇溶液10ml,0.45μm微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液,即得。  2.1.5線性關(guān)系考察分別精密量取“2.1.2”項(xiàng)下的對照品溶液適量,依次稀釋,30%乙醇溶液定容,分別配制成0.8768,2.192,21.92,43.84,65.76,87.68μg·ml-1的一系列濃度梯度的對照品溶液。分別吸取上述的對照品溶液各20μl,按“2.1.1”項(xiàng)下條件進(jìn)行測定。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)Y,葛根素對照品的濃度為橫坐標(biāo)X(μg·ml-1),

5、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程:Y=80.583X-16.705,r=0.99997。表明葛根素在進(jìn)樣量0.017536~1.7536μg范圍內(nèi),與峰面積呈良好線性關(guān)系?! ?.1.6精密度實(shí)驗(yàn)取“2.1.5”項(xiàng)下低、中、高濃度的3個(gè)對照品溶液,按“2.1.1”項(xiàng)下條件進(jìn)行測定。分別連續(xù)進(jìn)樣5次,得葛根素的峰面積,計(jì)算RSD分別為1.03%,0.29%,0.37%。表明儀器精密度良好。  2.1.7樣品溶液的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液,按0,1,2,4,8,12,24h時(shí)間間隔,在“2.1.1”項(xiàng)下條件進(jìn)行測定

6、,得葛根素峰面積,RSD為0.89%。表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定?! ?.1.8重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品5次,照“2.1.3”項(xiàng)下方法處理,制備樣品供試液。按“2.1.1”項(xiàng)下條件進(jìn)行測定,得葛根素峰面積,計(jì)算其質(zhì)量分?jǐn)?shù),結(jié)果RSD為0.69%。表明重復(fù)性良好?! ?.1.9加樣回收實(shí)驗(yàn)精密稱取已知含量的樣品9份,每份約5mg,加入不同量的葛根素對照品溶液,按“2.1.3”項(xiàng)下的方法制備供試液,按“2.1.1”項(xiàng)下條件進(jìn)行含量測定,計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。表1加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(略)結(jié)果表明色譜條件具有較

7、強(qiáng)的可靠性。  2.1.10提取物中葛根素含量測定取3批葛根總黃酮提取物適量,精密稱定,按“2.1.3”項(xiàng)下制備,按“2.1.1”項(xiàng)下條件進(jìn)行含量測定,測定結(jié)果按外標(biāo)法計(jì)算。結(jié)果見表2。表2提取物中葛根素含量測定結(jié)果(略)  2.2葛根總黃酮含量測定  2.2.1供試品溶液的制備取葛根總黃酮提取物約10mg,精密稱定,置10ml量瓶中,加入30%乙醇適量,溶解后定容。再從中精密吸取1ml置100ml量瓶中,以30%乙醇稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液。  2.2.2線性關(guān)系考察精密量取“2.1.2”項(xiàng)下的

8、對照品溶液0.5,1.0,1.5,2.0,2.5ml分別置于50ml量瓶中,加30%乙醇至刻度,搖勻,配制成2.192~10.92μg·ml-1的一系列濃度梯度的對照品溶液。以30%乙醇為空白對照,250nm處測定吸收度。以吸光度值為縱坐標(biāo)Y,葛根素對照品濃度為橫坐標(biāo)X(μg·ml-1),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程:Y=13.688X-0.020,r=0.99955,表明總黃酮含量在2.192~10.92μg·ml-1范圍內(nèi),與

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