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1、花楸成熟種胚組織培養(yǎng)方法探究材料與方法仁材料本試驗(yàn)中以花楸成熟種胚為外植體，種子采于黑龍江植物園的花楸成熟果實(shí)，調(diào)制后在49冰箱中貯存。將材料用自來水浸泡18h,然后用70%的酒精浸泡30s,再用2%的NaCIO溶液攪拌消毒處理10min，然后在無菌工作臺(tái)上用無菌水沖洗5~7次，再用解剖刀切破種皮子葉端，剝出成熟胚待接種之用。2?方法1）不定芽的誘導(dǎo)：把成熟胚接種在附加了不同濃度的6-BA（6■節(jié)基氨基瞟時(shí)XNAA（蔡乙酸）的MS和WPM固體培養(yǎng)基上。每組激素組合接種6瓶，每瓶接種5個(gè)種胚。觀察不定
2、芽生長(zhǎng)狀況，并在第20天開始統(tǒng)計(jì)不定芽誘導(dǎo)率。根據(jù)不定芽誘導(dǎo)率，選擇最佳培養(yǎng)基與激素組合。2）不定芽的增殖：觀察不定芽生長(zhǎng)狀況，當(dāng)不定芽生長(zhǎng)0.5cm時(shí)轉(zhuǎn)接到附加了不同質(zhì)量濃度的6-BA.IAA激素的MS增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。3）不定芽的生根：將增殖到長(zhǎng)度1.0-1.5cm的不定芽接種到附加了不同質(zhì)量濃度的IBA或NAA的1/2MS培養(yǎng)基上，進(jìn)行生根培養(yǎng)。4）培養(yǎng)條件：采用日光燈照射進(jìn)行光照培養(yǎng)，光照16h，黑暗8h，光強(qiáng)2000~3000lx,溫度（25±1）°C,濕度70%~80%
3、。5）數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：通過統(tǒng)計(jì)不定芽和生根的數(shù)量，分別計(jì)算出不定芽誘導(dǎo)率和生根率。不定芽誘導(dǎo)率=（誘導(dǎo)出不定芽外植體數(shù)/接種的外植體總數(shù)）×100%;生根率二（生根不定芽數(shù)/接入不定芽總數(shù)）×100%o結(jié)果與分析1?不同處理對(duì)花楸種胚不定芽誘導(dǎo)的影響1）不同基本培養(yǎng)基對(duì)花楸種胚不定芽誘導(dǎo)的影響：將接種在MS和WPM培養(yǎng)基上的花楸成熟種胚培養(yǎng)7d后，胚芽膨大，3周后部分成熟胚胚芽處出現(xiàn)不定芽。1個(gè)月后，不同培養(yǎng)基中花楸成熟胚不定芽誘導(dǎo)率岀現(xiàn)差異，誘導(dǎo)不定芽3周后統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)情況。在MS培
4、養(yǎng)基中，不定芽誘導(dǎo)率為80.33%;在WPM培養(yǎng)基中，不定芽誘導(dǎo)率為60.00%o經(jīng)過X2分析得出,MS和WPM培養(yǎng)基上產(chǎn)生的不定芽誘導(dǎo)率之間有顯著差異，即η=4.02>Xα=3.84O結(jié)果指出MS培養(yǎng)基對(duì)不定芽的誘導(dǎo)效果優(yōu)于WPM培養(yǎng)基。2）不同激素質(zhì)量濃度組合對(duì)花楸種胚不定芽誘導(dǎo)的影響：通過對(duì)激素質(zhì)量濃度組合篩選，本試驗(yàn)中選擇了不同質(zhì)量濃度的6-BA.NAA組合研究其對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響。將花楸成熟種胚培養(yǎng)12d后，觀察到生長(zhǎng)很好的嫩綠不定芽,3周后部分不定芽長(zhǎng)到1~2cm。1
5、個(gè)月后，不同激素質(zhì)量濃度組合處理中花楸成熟胚不定芽的誘導(dǎo)率出現(xiàn)差異。由表2可以看岀，在附加NAA0?5mg/L和6-BA0.5mg/L的MS培養(yǎng)基中,不定芽誘導(dǎo)率最高達(dá)80.33%,經(jīng)過X2分析得出，激素質(zhì)量濃度組合5與組合1、3、4、6、7、9之間芽誘導(dǎo)率均有顯著差異(X0.05=3.84),即η1-5=7.50>X0.05,η3-5=6.20>X0.05、η4-5=5.08>X0.05、η5-6=6.20>X0.05、η5-7=10.33>X0.05、&e
6、ta;5-9=5.08>X0.05,而其它各組合之間的芽誘導(dǎo)率無顯著差異。在附加NAA1?0mg/L和6-BA0.5mg/L的WPM培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)率最高為60.00%,經(jīng)過X2分析得出，激素質(zhì)量濃度組合6與組合1、2、8、9,組合2與組合7之間芽誘導(dǎo)率均有顯著差異，即η1-6=5.45>X0.05、η2-6=4.29>X0.05、η5-8=4.29>X0.05、η5-9=6.78>X0.05,而其它各組合之間芽誘導(dǎo)率無顯著差異。2?不同激素質(zhì)量濃度組合對(duì)花楸種胚不定芽
7、增殖的影響經(jīng)初代培養(yǎng)誘導(dǎo)不定芽，把不定芽轉(zhuǎn)接到附加了不同質(zhì)量濃度的6-BA、IAA的MS增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)過2周可進(jìn)一步誘導(dǎo)增殖出5~13個(gè)不定芽，與初代培養(yǎng)誘導(dǎo)不定芽的情形相似。培養(yǎng)中，如激素6-BA質(zhì)量濃度過高會(huì)出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象，在后期抑制根的生長(zhǎng)。不同激素質(zhì)量濃度組合對(duì)不定芽增殖的影響見表3。從表3可以看出，不定芽增殖的最佳激素組合和質(zhì)量濃度為IAA0.5mg/L+6-BA0.2mg/Lo3?不同質(zhì)量濃度的激素對(duì)花楸種胚不定芽生根的影響待不定芽高1.0-1.5cm時(shí)，從基部剪下，移至生根培
8、養(yǎng)基中，5d后芽基部陸續(xù)出現(xiàn)白色突起或愈傷組織,10-15d后可見發(fā)達(dá)的白色、黃綠色或紅色主根，1個(gè)月后大量須根產(chǎn)生，并形成發(fā)達(dá)的根系。激素IBA質(zhì)量濃度對(duì)生根數(shù)量的影響如表4所示。在1/2MS培養(yǎng)基中，IBA質(zhì)量濃度為0?2mg/L,根數(shù)量最大，不定根誘導(dǎo)率為70%，根長(zhǎng)隨著IBA質(zhì)量濃度的逐漸增高而漸漸變短，當(dāng)IBA質(zhì)量濃度為0.2?0.3mg/L時(shí)，根長(zhǎng)差別不大，然后根長(zhǎng)逐漸變大，從根的生長(zhǎng)狀態(tài)來看，添加IBA的處理中根粗壯，須根多，移栽容易成活。激素NAA質(zhì)量
