雞副嗜血桿菌的分離鑒定

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1、雞副嗜血桿菌的分離與鑒定摘要：雞副嗜血桿菌可以引起雞傳染性鼻炎(IC),以鼻炎和鼻竇發(fā)炎、結(jié)膜炎、流鼻涕、打噴嚏、面部腫脹為主要癥狀。對養(yǎng)禽業(yè)帶來重大的經(jīng)濟(jì)損失。本文根據(jù)細(xì)菌的分離培養(yǎng)、形態(tài)觀察、血凝試驗、易感動物回歸試驗及PCR鑒定對副嗜血桿菌進(jìn)行分離與鑒定。關(guān)鍵詞：雞副嗜血桿菌、分離、鑒定口20壯紀(jì)80年代以來，許多國家和地區(qū)均有爆發(fā)雞副嗜血桿菌病的報道，且近期雞副嗜血桿菌的發(fā)生率呈上升趨勢，它是集約化養(yǎng)雞場中重要的疫病之-o雞副嗜血桿菌可以引起雞傳染性鼻炎(IC),以鼻炎和鼻竇發(fā)炎、結(jié)膜炎、流鼻涕、打

2、噴嚏、而部腫脹為主耍癥狀。本病多見于雛雞樣和產(chǎn)蛋雞群，造成淘汰雞數(shù)顯著增加以及產(chǎn)蛋率顯著下降，同時易引起流感或新城疫的并發(fā)，造成雞場的重大經(jīng)濟(jì)損失。副雞嗜血桿菌(llacmophilusparagallinamm,Ilpg)是一種引起雞急性上呼吸道疾病的致病菌。該呼吸道疾病俗稱雞傳染性鼻炎(Infcctiouscoryza,1C),臨床上以面部水腫、鼻竇炎、流淚為主要特征，可引起產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)蛋量下降，育成雞的生長受阻、開產(chǎn)期推遲，肉雞增重下降，給養(yǎng)禽業(yè)造成巨人的經(jīng)濟(jì)損失C1,21o1920年，Beach首次對

3、雞傳染性鼻炎進(jìn)行了報道。1931年，DeBlieck成功分離了病原。自20世紀(jì)80年代以來，在我國河北、北京、云南、山東、湖北等省市先后爆發(fā)雞傳染性鼻炎。馮文達(dá)于1987年首先在北京分離到1株細(xì)菌，證實了副雞嗜血桿菌在我國的廣泛存在⑶。按照Page的分型方法，通過平板凝集試驗可將副雞嗜血桿菌分為A、B和C3個血清型⑷。喬朋波⑸研究表明不同血清型的副雞嗜血桿菌在生長特性、致病性、藥物嫩感性和外膜蛋門結(jié)構(gòu)等方面均存在差異。忖前，在我國副雞嗜血桿菌以A型和C型菌株的流行為主,部分地區(qū)己經(jīng)有B型株的存在⑹。流行于我

4、國的不同血清型副雞嗜血桿菌的先后有分離與鑒定的報道。研究表明，相同血清型間有交叉保護(hù)作用，不同血清型之間無交叉保護(hù)作用⑺鐵1.雞副嗜血桿菌的生物學(xué)特征1.1形態(tài)特征和培養(yǎng)特性雞副嗜血桿菌為革蘭氏陰性菌，呈兩極染色特性，無運動性，經(jīng)24h培養(yǎng),生長成短桿狀或球桿狀，單在、成雙或短鏈，長1?3Pm,寬0.4?0.8unio有毒力的菌株帶有莢膜。木菌在含10%C02條件下，血瓊脂培養(yǎng)基上于37°C培養(yǎng)24?48h,發(fā)育成青灰色、半透明、光滑、邊緣整齊、直徑約0.3mni的針尖狀菌落，不溶血，在斜射陽關(guān)下可見光滑型

5、帶彩虹光和粗糙型無彩虹光型的菌落形態(tài)。本菌為兼性厭氧菌，需要V因子，葡萄球菌在生長過程中產(chǎn)生V因子。把雞副嗜血桿菌與葡萄球菌接種在同一血液瓊脂上，可在葡萄球菌菌落周圍發(fā)現(xiàn)吒盛生長的雞副嗜血桿菌，形似“衛(wèi)星”狀。本菌是唯一?不能發(fā)酵海藻糖、半乳糖,有氧化氫酶陰性的嗜血桿菌。1.2抗原性和抵抗力該菌分成A、B、C3個血清型。A和C型有夾膜，致病力較強；B型無夾膜，致病力一般較弱。不同血清型之間無交叉保護(hù)力，同一血清型的不同亞型之間有部分交叉保護(hù)力。目前，我國分離鑒定的雞副嗜血桿菌主要是A型，其次為C型，13型偶

6、有發(fā)生。副嗜血桿菌在離開雞體后抵抗力非常弱。培養(yǎng)基上的細(xì)菌在4°C時能存活2周，在口然環(huán)境中數(shù)小時即死亡；45°C?55°C于2?lOmin死亡，在真空冷凍條件下可以保存10年。一般消毒藥均能將其殺死。2感染雞副嗜血桿菌的流行病學(xué)、癥狀與病理變化雞是副嗜血桿菌的自然宿主，病原菌由鼻孔侵入，主要在鼻腔和眶下竇的黏膜上增荊，并隨鼻液排出。各種周齡的雞均易感，初產(chǎn)蛋雞最敏感，病程一般為1?2周。傳染源為病雞和隱性帶菌雞，主要通過空氣和塵埃，也可經(jīng)污染的飼料、飲水用具、飼養(yǎng)人員的流動而傳播。本病潛伏期很短，鼻腔接種

7、病雞分泌物24?48h即發(fā)病。自然感染潛伏期為1?3do最初，病雞無明顯癥狀，僅見鼻中有稀薄水樣鼻液，打噴嚏。幾天后大批雞感染，發(fā)病率可高達(dá)90%以上。成雞鼻腔內(nèi)流岀漿液性或粘液狀分泌物，堵塞鼻孔而出現(xiàn)呼吸困難和甩頭。隨后面部發(fā)炎，眼腫脹流淚，有膿性干酪樣分泌物堆積。嚴(yán)重的整個頭部腫人，失明。雛雞發(fā)病常見張口呼吸，眼瞼粘著，多因覓食和行動困難而饑餓、衰竭死亡，幸存雛雞發(fā)育停滯或增重緩慢，淘汰率一般在30%以上。蛋雞除表現(xiàn)成雞癥狀外，開產(chǎn)期延遲，產(chǎn)蛋量下降。剖檢可見鼻腔、眶下竇和眼結(jié)膜的急性卡他性炎癥變化,面

8、部及肉垂的皮下水腫。病程較長的可在氣囊、腹腔和輸卵管內(nèi)見有乳黃色T酪樣分泌物。產(chǎn)蛋雞卵泡松軟、血腫、壞死或萎縮，腹膜炎，公雞睪丸萎縮。病理組織學(xué)檢杳，可見鼻腔、眶下竇利氣管黏膜上皮細(xì)胞脫落、裂解和增生，黏膜固有層充血、水腫并伴有異染性細(xì)胞浸潤。3?材料與方法含輔酶I的雞肉湯瓊脂平板、兔全血平板、麥康凱瓊脂、巧克力瓊脂平板、革蘭氏染色液等，均為自制；dNTP、PCRburet、TaqDNA聚合酶、DNAMarker