3、.14-2.05)mino【臨床意義】1.同試管法CT測(cè)定，但較其敏感，重復(fù)性也較好，可檢出因子WhC小于45%的亞臨床型血友病。2.是監(jiān)測(cè)體外循環(huán)肝素用量的良好指標(biāo)乙一。實(shí)驗(yàn)二、血漿游離血紅蛋白測(cè)定(鄰一甲聯(lián)苯胺法)【實(shí)驗(yàn)原理】鄰一甲聯(lián)苯胺在酸性溶液屮和過(guò)氧化氫與血紅蛋白共同作川牛成氧化型聯(lián)苯胺，產(chǎn)住綠色一藍(lán)色一紫色，其顏色的深淺與血漿游離血紅蛋口的含量呈正相關(guān)。【試劑】1.2g/L鄰一甲聯(lián)苯胺溶液稱取鄰一甲聯(lián)苯胺0.2g,溶于冰醋酸60ml,加蒸飾水至100ml,置于棕色瓶?jī)?nèi)于冰箱保存，色變暗應(yīng)重配。2.1%過(guò)氧化氫溶液用30%過(guò)氧化氫原液新鮮配制。3
4、.10%冰醋酸溶液。取10ml冰醋酸,加蒸館水至100mlo4.血紅蛋白應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液將血紅蛋白貯存液用生理鹽水稀釋成lOnig/lOOml備用。5.抗凝試管取0.2ml100U/ml肝素于試管內(nèi)，在80°C以下烘干，每管可抗凝2ml全血?！静僮鞣椒ā?.將抗凝全血分離血漿。2.取試管3支，分別標(biāo)明測(cè)定、標(biāo)準(zhǔn)和空白，分別加入血漿、應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液，再向各管中分別加入鄰一甲聯(lián)苯胺溶液及1%過(guò)氧化氮溶液各1.0ml,充分混勻，放置lOmirio3.于上述3支試管內(nèi)分別加入10%冰酷酸溶液10ml混勻，用435nm波長(zhǎng)比色，以空白調(diào)“0”，讀各管吸光度。4.計(jì)算:測(cè)定管吸
5、光度游離Hb(mg/L)=X100標(biāo)準(zhǔn)管吸光度【質(zhì)量控制】1.-?切容器均應(yīng)避免血紅蛋口污染，標(biāo)本勿溶血，否則可引起假陽(yáng)性。2.過(guò)氧化氫溶液濃度要準(zhǔn)，新鮮配制。3.聯(lián)苯胺醋酸的含水量不能低于15%和超過(guò)30%,否則均可引起吸光度降低。4.標(biāo)準(zhǔn)液的加入量一定要準(zhǔn)。【參考區(qū)間】＜40mg/L【臨床意義】血漿游離血紅蛋白含量增加是血管內(nèi)溶血的特征。血漿中血紅蛋白含量超過(guò)與血清中結(jié)合珠蛋白的結(jié)合能力時(shí)，其含量即可升高。微血管內(nèi)溶血時(shí)，血漿游離血紅蛋白含量均明顯升高。PNH為200?2500mg/L,輸不合血型后為150?5000mg/Lo溫抗體型自身免疫性溶血性貧
6、血、鐮狀細(xì)胞貧血及地屮海貧血時(shí)血漿游離血紅蛋白可輕度或屮度增加。血管外溶血?jiǎng)t正常。實(shí)驗(yàn)三、血清結(jié)合珠蛋白測(cè)定(比色法)【實(shí)驗(yàn)原理】血清結(jié)合珠蛋口(Up)是肝臟產(chǎn)牛的a2糖蛋白，它與游離的血紅蛋白(Hb)具有特殊的親合力，町形成穩(wěn)定的Hb-Hp復(fù)合物，后者在弱酸性(pH4)條件下，具有過(guò)氧化物酶的活性，測(cè)具活性町間接反映11P的含量?！驹噭?.乙酸緩沖液0.2mol/L(pH4)稱取乙酸鈉(NaAC?3H20)2.8g,冰乙酸5.7ml溶解,加蒸餡水至500mlo2.0.1%(V/V)愈創(chuàng)木酚溶液取lml愈創(chuàng)木酚溶液于500ml乙酸緩沖液中,加蒸係水至lO
7、OOmlo3.0.3%過(guò)氧化氫溶液臨川前配制。4.0.5g/L高鐵血紅蛋白液。【操作方法】1.取靜脈血分離血清，避免溶血。2.取受檢血清0.4ml,與等量高鐵Hb溶液混合。3.取上述混合液0.2ml,加入于已預(yù)溫（25°C）的愈創(chuàng)木酚5沁溶液中，再加入0?5ml0.3%過(guò)氧化氫，于25°C水浴內(nèi)作用8min,注意避光。每份標(biāo)木均應(yīng)雙份同吋測(cè)定。4.用蒸館水調(diào)“0”點(diǎn)，440nm處讀取吸光度。5.由校正曲線杏出受檢血清中Hp含量?！举|(zhì)量控制】1.受檢血清要避免溶?血。2.電泳時(shí)溫度不能過(guò)高，應(yīng)把電泳槽置于冷水屮電泳。否則電泳效果差，區(qū)帶不易區(qū)分。3.電泳液應(yīng)
8、經(jīng)常更換，防止因pH及離子強(qiáng)度改變對(duì)電泳效果的影響。【參考區(qū)間】0
