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《豬繁殖與呼吸綜合征病毒豬圓環(huán)病毒型和豬瘟病毒混合感染的診斷與防制分析》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、豬繁殖與呼吸綜合征、環(huán)病毒2型和豬瘟病毒的混合感染的診斷與防制分析夏偉3李鵬'危艷武'張宇輝彳羅土均彳馮春復(fù)彳1、黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)黑龍江大慶1633192、哈爾濱維科牛物技術(shù)開發(fā)公司黑龍江哈爾濱1500013、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所豬傳染病研究宗哈爾濱150001摘要:2011年12刀，南方某大型豬場爆發(fā)以母豬流產(chǎn)，死胎，弱仔，哺乳期仔豬發(fā)生體溫升高，皮膚發(fā)紐，呼吸衰竭，頑固性腹瀉；保育仔豬發(fā)燒，聚堆，皮膚紅，昏睡，腹股溝淋巴結(jié)腫大為主要癥狀的疾病，死淘率高。剖殺3頭發(fā)病哺乳仔豬，3頭死亡保育豬取淋巴結(jié)、脾、肺臟病變組織用PCR,RT-PCR方法分別檢測豬繁
2、殖與呼吸綜合征病毒，I員I壞病毒2型,豬瘟野毒為陽性，結(jié)合本病的臨床癥狀和病理剖檢確診為豬繁殖與呼吸綜合征，圓環(huán)病毒2型，豬瘟的混合感染。關(guān)鍵詞:豬繁殖與呼吸綜合征病毒；圓環(huán)病毒2型；豬瘟病毒；混合感染；診斷豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)是世界范圍內(nèi)一種重要的豬傳染病,1996年哈爾濱獸醫(yī)研究所郭寶清首次證實(shí)我國有PRRS存在[1],并從繁殖障礙豬群分離到PRRSV[2]O近幾年對我國發(fā)病豬酬的血清檢測結(jié)果表明，該病現(xiàn)已存在于我國大部分地區(qū)[3],并呈暴發(fā)式流行,給養(yǎng)豬業(yè)造成了極大的經(jīng)濟(jì)損失。特別口2006年“豬高熱病”流行后，據(jù)有關(guān)研究表明，豬繁殖與呼吸綜合征變開毒
3、株是山普通豬繁殖與呼吸綜合征病毒的NSP2段基因發(fā)牛?了缺失變界而來，其臨床癥狀主耍是出現(xiàn)“三高一低”即高熱(40°C以上)、高發(fā)病率、高死亡率、低治愈率；豬群出現(xiàn)皮膚發(fā)紅，個別有神經(jīng)癥狀，能導(dǎo)致母豬流產(chǎn)共至死亡，給養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展帶來重創(chuàng)。豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)感染已經(jīng)是威脅當(dāng)前世界養(yǎng)豬業(yè)的一個重要疾病，1991年P(guān)MWS首次在加拿大被發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)1前已證實(shí)呈世界性流行。PCV2感染引起的相關(guān)疾病在我國的流行情況也I?分嚴(yán)重，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[4,5]o我國學(xué)者在我國許多地方都分離出了這種病毒，且和其他病毒混合感染的情況FI益明顯，PCV-2感染病例在臨床上經(jīng)
4、?？梢姟Ｘi瘟(CSF)是山豬瘟病毒(CSFV)引起的一種高致死性、烈性傳染病。近兒年隨著我國規(guī)?；B(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，豬瘟的發(fā)生出現(xiàn)一些新特點(diǎn),表現(xiàn)為發(fā)病年齡小、散發(fā)流行、混介感染以及非典型性或隱性等特點(diǎn)[6],這又給本病的防治帶來了很大的困難。生產(chǎn)實(shí)踐中，PRRSV、PCV?2混合感染[7],PRRSV、CSFV混合感染[8],CSFV、PCV2混合感染[9]最為常見。本試驗(yàn)應(yīng)用PCR,RT-CR方法結(jié)合臨床癥狀和病理剖檢對上海某豬場豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV),圓環(huán)病毒II型(PCV2),豬瘟病毒(CSFV)混合感染進(jìn)行了確診,從而為豬場防制本病，制定合理的免疫
5、程序提供科學(xué)依據(jù)。1材料與方法1.1病料來源來口上海某豬場的6份發(fā)病豬和死亡豬的肺臟、脾臟、淋巴結(jié)等臟器，編號，3、4、5號為哺乳仔豬，6、7、8號為保冇仔豬。冷凍運(yùn)送，?20°C保存?zhèn)溆谩?.2酶和其他試劑PCR擴(kuò)增試劑盒、飽和酚、TaqDNA聚合酶、dNTPs、EB、DEPC、提取總RNA用TRIzol,BioFlux公司產(chǎn)uu,Cycle-PureKit,OMEGA公司產(chǎn)品。DL2000Marker,TaKaRaRNAPCRKit(AMV)Ver.3.0購自大連寶生物有限責(zé)任公司；其他試劑均為分析純試劑。1.3引物設(shè)計(jì)及合成根據(jù)GenBank上發(fā)表的PRRSV基
6、因序列(AY032626;AY262352),用Oli-go6.0軟件設(shè)計(jì)引物,上游引物5’?AGAACTGTGACAACAACGCTG?3',下游引物：5'-GAGTCGATGATGGCTTGAGCT-3',擴(kuò)增缺失株(高致病性PRRSV毒株)和非缺失株(經(jīng)典PRRSV毒株)預(yù)期擴(kuò)增產(chǎn)物長度分別約263bp和350bp。由寶牛物工程(人連)有限公司合成。根據(jù)已發(fā)表的PCV-2核酸全序列合成了1對特異性的PCR引物。上游引物:5‘-CAGCAAGAAGAATGGAAGAAGCGGA-3z:下游弓I物:5‘-CCAGGACTACAATATCCGTGTAACT-3z。擴(kuò)增
7、Fl的基因片段長為1057bp,引物由寶生物工程(大連)有限公司合成。參考GenBank屮公布的豬瘟病毒(CSFV),石門(shimen)株基因組，設(shè)計(jì)合成了1對CSFV特界性的引物Csfv-F：5'?AAGTAACAGAGACATGAATGG-3'Csfv-R：5'-CCAAAAGGATAGGTAGGGT-3'由寶生物工程(大連)冇限公司合成。1.4病料處理及DNA的提取將組織樣品稱量、研磨，制成勻漿后反復(fù)凍融3次，取上清液按照常規(guī)方法提取樣品總DNA參照文獻(xiàn)[10]1.5RNA的提取及cDNA合成參照文獻(xiàn)[11]1.6PRRSV—RT-PCR反應(yīng)
