某豬場(chǎng)豬偽狂犬病病毒與豬瘟病毒混合感染的診斷.pdf

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1、動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展。2014，35(6)：171—174ProgressinVeterinaryMedicine某豬場(chǎng)豬偽狂犬病病毒與豬瘟病毒混合感染的診斷吳憶春(濱州職業(yè)學(xué)院生物工程學(xué)院，山東濱州256603)摘要：山東某豬場(chǎng)發(fā)病豬數(shù)頭，經(jīng)癥狀觀察與臨床剖檢，結(jié)合當(dāng)?shù)亓餍胁W(xué)調(diào)查及該豬場(chǎng)免疫情況，初步診斷為豬偽狂犬病病毒(Pseudorabiesvirus，PRV)與豬瘟病毒(Classica1swinefevervirus，CSFV)混合感染。因此采集患病豬只的病變組織，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷。將病變組織按常規(guī)方法處理后，提取總DNA與RNA，經(jīng)PCR擴(kuò)增，獲得PRV陽(yáng)性目的片段約2

2、17bp；經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增出CSFV陽(yáng)性片段約510bp；證明該豬場(chǎng)為PRV與CSFV混合感染。隨后應(yīng)用BHK一21細(xì)胞與PK-15細(xì)胞分別進(jìn)行PRV與CSFV的分離培養(yǎng)，并盲傳3代。結(jié)果顯示，經(jīng)BHK一21細(xì)胞傳代培養(yǎng)至F3代，可見(jiàn)典型的PRV細(xì)胞病變，經(jīng)PCR進(jìn)一步鑒定為PRV，毒力測(cè)定其TCID5。為10·鵲TCID5。／o．1mL；PK-15細(xì)胞傳代培養(yǎng)至F3代，經(jīng)PCR鑒定為CSFV陽(yáng)性。綜合以上結(jié)果，最終確診該豬場(chǎng)為CSFV與PRV混合感染。隨后采用緊急接種的預(yù)防方法，并進(jìn)行患病豬只的部分淘汰，最終獲得了滿(mǎn)意的防控效果，降低了經(jīng)濟(jì)損失。關(guān)鍵詞：偽狂犬病病

3、毒；豬瘟病毒；混合感染；診斷中圖分類(lèi)號(hào)：$859．795；$858．28文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào)：1007—5038(2014)06—0171—04偽狂犬病(Pseudorabies，PR)是由偽狂犬病病慢，甚至出現(xiàn)僵豬；同時(shí)，該場(chǎng)懷孕母豬呈現(xiàn)流產(chǎn)、早毒(PRV)引起豬、牛、羊等多種動(dòng)物感染的一種以發(fā)產(chǎn)、產(chǎn)死胎等現(xiàn)象。該豬場(chǎng)發(fā)病初期，經(jīng)多種抗生素?zé)帷⑵姘W(除豬外)及腦脊髓炎為主要特征的急性傳與抗病毒藥物治療無(wú)效。后經(jīng)本實(shí)驗(yàn)室剖檢，可見(jiàn)染病。豬是PRV的自然宿主，同時(shí)也是攜帶者與傳病死豬肝臟腫大、出血；脾臟出血，個(gè)別豬脾臟邊緣播者，不同日齡的豬感染后可呈現(xiàn)出不同的癥狀，病出現(xiàn)梗

4、死灶；胃底部有出血點(diǎn)，腸道呈卡他性炎癥；死率隨日齡增長(zhǎng)而降低，但可造成育肥豬增重緩慢、喉頭水腫；肺部出血、水腫；心包少量積液，但無(wú)出血料肉比顯著增高，母豬屢配不孕、流產(chǎn)、死胎及木乃點(diǎn)；全身淋巴結(jié)腫大、出血。綜合以上癥狀及剖檢變伊胎等現(xiàn)象，給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)較大的損失_1]。世界動(dòng)化，結(jié)合該豬場(chǎng)免疫情況，初步判斷為PRV繼發(fā)物衛(wèi)生組織(OIE)將該病列為必須報(bào)告的傳染病，CSFV混合感染。針對(duì)該病情，首先進(jìn)行全場(chǎng)帶豬我國(guó)農(nóng)業(yè)部將該病列為二類(lèi)動(dòng)物疫病。近幾年來(lái)，消毒，隔離并淘汰部分病豬；隨后進(jìn)行全群緊急接隨著畜牧業(yè)的集約化、規(guī)?；牟粩鄶U(kuò)大，該病在我種，懷孕后期的母豬不免疫，新生仔豬

5、出生后立即注國(guó)不同地區(qū)呈不斷擴(kuò)散與蔓延的趨勢(shì)]。射CSFV活疫苗，2h后開(kāi)始哺乳，全場(chǎng)20d以上的豬瘟(Classicalswinefever，CSF)是由豬瘟病毒豬，緊急接種CSFV活疫苗，仔豬出生后7d注射(CSFV)引起的一種急性、熱性、接觸性傳染病，病死PRV雙基因缺失活疫苗。經(jīng)采取防控措施，該豬場(chǎng)率極高，給我國(guó)乃至世界養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展帶來(lái)嚴(yán)重危的疫情得以有效控制，從而為本地區(qū)該類(lèi)疫病的防害。隨著CSF疫苗的研發(fā)與廣泛使用，CSF在一定控提供了參考。程度上得到了控制，無(wú)大規(guī)模暴發(fā)的疫情出現(xiàn)，但是1材料與方法仍呈散發(fā)與繼發(fā)性流行，不斷困擾著我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展[3]。2013

6、年7月～8月，在山東省某豬場(chǎng)，未1．1材料斷奶仔豬與育肥豬相繼出現(xiàn)了體溫升高、頑固性下1．1．1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇體重為2kg～2．5kg的大痢、呼吸困難、嘔吐、肌肉震顫、轉(zhuǎn)圈等臨診癥狀，觸耳白家兔，試驗(yàn)前3d，每日上午與下午分別測(cè)量體診個(gè)別豬只腹股溝淋巴結(jié)明顯腫大，仔豬病死率可溫1次，并采血分離血清，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定達(dá)6O，育肥豬病死率可達(dá)309／6，存活豬只生長(zhǎng)緩其OD值；選取體溫正常、溫度差波動(dòng)較小、PRV與收稿日期：2013—12—18作者簡(jiǎn)介：吳憶春(1976一)，女，安微安慶人，碩士研究生，講師，主要從事微生物學(xué)和生物制品學(xué)研究。172動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展2014年第3

7、5卷第6期(總第252期)CSFV血清學(xué)陰性的家兔，飼養(yǎng)于山東綠都生物科并盲傳3代。②PRVTCID。的測(cè)定：將上述病毒分技有限公司動(dòng)物房，室溫23℃±2。C，供給全價(jià)飼離培養(yǎng)液進(jìn)行1O～1O。倍比稀釋?zhuān)尤腴L(zhǎng)至單層料，自由采食與飲水。的BHK一21細(xì)胞96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，100j工L／孔，1．1．2細(xì)胞PK一15與BHK一21細(xì)胞由本實(shí)驗(yàn)室8孔／稀釋度，連續(xù)培養(yǎng)5d～7d，觀察并記錄細(xì)胞病保存。變，依據(jù)Reed—Muench法計(jì)算PRV的TCIDs。。③1．1．3試劑細(xì)胞培養(yǎng)基DMEM，GIBCO公司產(chǎn)PRV的鑒