“鄞紅”葡萄SSR反應(yīng)體系的建立及多態(tài)性分析【開題報告】

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1、畢業(yè)論文開題報告生物工程“鄞紅”葡萄SSR反應(yīng)體系的建立及多態(tài)性分析1.課題研究意義及國內(nèi)外研究現(xiàn)狀葡萄屬葡萄科(Vitaceae)葡萄屬(VitisL.)，落葉木質(zhì)藤本，品種繁多，起源于黑海和地中海沿岸，分布廣泛[1]。在我國，北起黑龍江，南至海南島，各省市均有栽培。我國葡萄種質(zhì)資源極其豐富，目前栽培的葡萄品種大多屬于歐亞種群和歐美雜交種。歐亞種葡萄（V.viniferaL.）起源于黑海和地中海沿岸，耐濕性差，適應(yīng)于夏干氣候的干燥地區(qū)栽培，世界上大部分優(yōu)良鮮食品種屬于此類；美洲葡萄（V.labruscaL.）原產(chǎn)于加拿大東南部，適應(yīng)于夏濕地帶，該種品質(zhì)較差，而與歐亞種的雜交種有一些優(yōu)

2、良品種，其耐濕性相對較強(qiáng)，但在濕度較高和光照不良條件下品質(zhì)和產(chǎn)量也得不到保證。高質(zhì)量DNA的獲得是進(jìn)行分子雜交、基因庫構(gòu)建、核酸分析等分子生物學(xué)研究的首要步驟，黨尉,尉亞輝等[2]針對5種提取總DNA的方法，分別是CTAB法，高鹽低pH法，簡易法，高鹽沉淀法以及改良SDS法，做適當(dāng)改進(jìn)并進(jìn)行比較分析，建立了一種快速從葡萄中提取高純度、高得率總DNA的方法，為葡萄分子生物學(xué)的深入研究奠定技術(shù)基礎(chǔ)。分子標(biāo)記技術(shù)在葡萄上的應(yīng)用的目前主要有RFLP標(biāo)記技術(shù)、RAPD標(biāo)記、AFLP標(biāo)記與微衛(wèi)星DNA標(biāo)記等。微衛(wèi)星(microsatellites)或簡單序列重復(fù)(simplesequencerep

3、eats，SSRs)以1-6個堿基為基本單元的串聯(lián)重復(fù)序列，具有含量豐富、多態(tài)性高、共顯性和檢測方法簡單等優(yōu)點(diǎn)，是研究植物遺傳多樣性的優(yōu)異的分子標(biāo)記之一，已被用于多種植物的遺傳多樣性研究[3]。分子標(biāo)記技術(shù)應(yīng)用于葡萄的品種鑒定與分類、葡萄系譜分析、葡萄分子遺傳圖譜的構(gòu)建、葡萄目標(biāo)性狀連鎖基因標(biāo)記等。分子標(biāo)記的應(yīng)用為葡萄遺傳育種研究開辟了新的途徑，它為葡萄種質(zhì)資源和品種的鑒定、分類、遺傳圖譜構(gòu)建及目標(biāo)性狀基因標(biāo)記等提供了理想的方法。在資源利用方面，分子標(biāo)記技術(shù)是迅速而有效的DNA檢測工具，可以進(jìn)行資源探查、挖掘、收集葡萄屬植物的重要農(nóng)藝基因分子標(biāo)記的應(yīng)用，尤其是在分子輔助早期選擇方面的應(yīng)

4、用前景更為廣闊。在葡萄遺傳育種中，有目的的將所需基因?qū)?如將抗病基因?qū)藷o核品種中)，通過胚培養(yǎng)等組織培養(yǎng)技術(shù)培育出新品種然后對葡萄雜交后代群體．根據(jù)分子遺傳圖譜和重要基因的分子標(biāo)記，進(jìn)行早期選擇，篩選出含有目的基因的植株，這將大大提高選擇的準(zhǔn)確性和育種效率，縮短育種年限，加快葡萄育種進(jìn)程。[4]本課題在參考最新文獻(xiàn)上所述方法研究“鄞紅”葡萄SSR反應(yīng)體系的建立及多態(tài)性分析，以鑒別出經(jīng)輻照處理后的“鄞紅”葡萄并分析出其遺傳多樣性，為今后試驗(yàn)提供依據(jù)或作為他人參考之用。2.課題研究的主要內(nèi)容、預(yù)期目標(biāo)和研究方案主要內(nèi)容：進(jìn)行葡萄SSR反應(yīng)體系的優(yōu)化，主要優(yōu)化方法參考張淑靜，楊敏生等[5

5、],優(yōu)化內(nèi)容包括對影響反應(yīng)的6個主要因素Mg2+濃度、dNTP濃度、Taq酶濃度、引物濃度、模板DNA濃度、退火溫度等，分別設(shè)置梯度進(jìn)行比較試驗(yàn)。建立SSR反應(yīng)最佳體系后利用多個引物組合對所有材料進(jìn)行多態(tài)性檢測，從中篩選出譜帶清晰，并呈現(xiàn)多態(tài)的引物組合，取重復(fù)性較好的DNA譜帶用于統(tǒng)計(jì)分析，統(tǒng)計(jì)出多態(tài)性帶和特異性條帶從而直觀的觀察到輻照處理后各個“鄞紅”葡萄品種間是否具有較高的多態(tài)性，品種間變異是否較大[6]目標(biāo)：建立葡萄SSR反應(yīng)最佳體系，分析經(jīng)輻照處理后“鄞紅”葡萄品種的多態(tài)性研究方案:“鄞紅”葡萄各材料的DNA提取PCR反應(yīng)體系梯度Mg2+濃度、dNTP濃度、Taq酶濃度、引物濃

6、度、模板DNA濃度、退火溫度設(shè)置篩選最佳反應(yīng)體系6%變形聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測觀察分析其多態(tài)性3.課題進(jìn)度計(jì)劃2010.11.10-11.20：“鄞紅”葡萄各材料的DNA提取2010.11.20-12.20：PCR反應(yīng)體系梯度Mg2+濃度、dNTP濃度、Taq酶濃度、引物濃度、模板DNA濃度、退火溫度設(shè)置并篩選最佳反應(yīng)體系2010.12.20-1.15：6%變形聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測4.參考文獻(xiàn)[1]郝宇，張淑靜，張世紅，梁海永．葡萄品種資源的SSR鑒定及遺傳多樣性分析[J]．河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2010,33(1):54-55[2]黨尉,尉亞輝,張華平,劉科.葡萄總DNA提取方法的比較

7、研究[J].西北大學(xué)學(xué)報,2003,33(5):572-574[3]楊進(jìn).SSR標(biāo)記技術(shù)在植物遺傳多樣性研究上的應(yīng)用[J].農(nóng)業(yè)生物技術(shù)科學(xué),2006,22(7):90-94[4]王勁松,萬怡震,張劍俠,段朝輝.分子標(biāo)記及其在葡萄屬植物研究上的應(yīng)用[J].2001,20:70-75[5]張淑靜,楊敏生,梁海永，王衛(wèi)政.葡萄SSR反應(yīng)體系的優(yōu)化[J].河北林果研究,2008,23(3):281-286[6]張淑靜.葡萄SSR反應(yīng)體系的建立及遺傳多