氣孔運(yùn)動(dòng)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)

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1、氣孔運(yùn)動(dòng)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)一、材料選擇：10片葉的擬南芥（移栽以后11-13d左右，大概是3周大小的苗子）二、葉子的選擇;選擇次新一輪的葉片，要求大小，狀態(tài)一致。如果葉片上有褶皺等不健康的狀態(tài)均不進(jìn)行選擇。三、所需準(zhǔn)備的物品：2.0離心管，冷光源，牙簽，鑷子，顯微鏡四、具體操作步驟：1、選取整齊一致的擬南芥植株，選取同一輪葉片中大小，狀態(tài)一致的葉片，帶葉柄剪下。2、葉片背面朝上，放入表皮條緩沖液中（2.0離心管），浸入緩沖液液面以下。每個(gè)管中一片葉子，且不同管中葉片的液下深度要求一致。3、將不同的株系均勻置于冷光源下，照射2-3h。4、撕取葉片中脈一側(cè)的下表皮進(jìn)行觀測(cè)，看氣孔是否已經(jīng)完全打開。一般

2、2.5-4之間算是完全打開，最好是3-4。5、若氣孔已經(jīng)完全打開，則加入ABA進(jìn)行處理2-3h。6、撕取葉片中脈另一側(cè)的下表皮進(jìn)行觀測(cè)，一般野生型的氣孔關(guān)閉到1.0以下才算是處理成功，否則需要提高ABA濃度。注意：1、適合氣孔觀察的擬南芥只有幾天，葉片太老或太嫩都不合適，且容易撕下葉肉。一般有葉肉撕下的部分氣孔開度都不夠精準(zhǔn)。2、一般一個(gè)表皮條只觀測(cè)最中間的部分，四周的不精確，葉柄部位的氣孔也不在統(tǒng)計(jì)范圍之內(nèi)。3、操作時(shí)間太長(zhǎng)會(huì)增加誤差，所以對(duì)于熟練的人來說，一次最多只觀察5個(gè)樣本。4、一個(gè)樣本一般觀察2-3個(gè)視野，每個(gè)視野先大概瀏覽一下是否整齊，然后記錄下氣孔開度。視野中所有氣孔開度都

3、記錄下來。5、顯微鏡一般使用40倍鏡，比較精確。6、因?yàn)槿~片厚度不均，所以應(yīng)該不停的調(diào)焦，以保證正在觀測(cè)的氣孔達(dá)到最清楚的狀態(tài)。每個(gè)人的標(biāo)準(zhǔn)不同，所以應(yīng)該由一個(gè)人完成，以避免人為誤差。7、因?yàn)橹参餁饪椎倪\(yùn)動(dòng)也存在一定的節(jié)律，所以經(jīng)驗(yàn)性的操作時(shí)間是早上9：00開始取葉片11：30-12：00ABA處理比較合適，避免在中午的時(shí)候操作。（針對(duì)早上6：00開燈的16/8h光照情況）8、當(dāng)不知道植株表型時(shí)可以先用10μM-25μMABA處理，2-2.5h后氣孔關(guān)閉為1時(shí)即可。9、ABA用無水乙醇配置成100mM母液，工作液為1mM，用水稀釋即可。平時(shí)存于-20℃。