實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)(大黃)

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1、實(shí)驗(yàn)二大黃中蔥醍類成分的提取分離和鑒定(%1)概述大黃記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》等許多文獻(xiàn)屮，用于泄下、健胃、清熱、解毒等。自古以來，大黃在植物性瀉下藥中占有重要位置，是一位很早就被各國(guó)藥典所收載的世界性生藥。大黃的種類繁多，優(yōu)質(zhì)大黃是蓼科植物掌葉大黃(RheumpalmatclmL),人黃(R.officinaleBaill)及唐占特人黃(R.tangutiumMaxim.etRegli)的根莖及根，大黃中含有多種游離的耗基恿釀?lì)惢衔镆约八鼈兣c糖所形成的廿。已經(jīng)知道的疑基蔥陀主耍有下列五種：0H00HRiR2名稱晶

2、形熔點(diǎn)■H?COOH大黃酸(Rhein)黃色針晶318?320°C-ch3-OH大黃素(Emodin)橙色針晶256?257°C-H-CH2OH蘆薈大黃素橙色細(xì)針晶206?208°C(Aloe-emodin)-CH3-人黃索甲H^(Physcion)磚紅色針晶207°C?H-ch3大黃酚(Chyrsophanol)金色片狀結(jié)196°C晶大黃中恵釀昔元，其結(jié)構(gòu)不同，因而酸性強(qiáng)弱也不同。大黃酸連有-COOH,酸性最強(qiáng)；大黃素連有B?OH,酸性第二；蘆薈大黃素連有節(jié)醇?0H,酸性第三；大黃索甲醸和大黃酚均具有1,8?二

3、酚拜基，前者連有?0CH3和-CH?,后者只連有￡出,因而后者酸性排在第四位。(%1)實(shí)驗(yàn)日的和要求1.熟悉蔥釀?lì)惓煞值奶崛》蛛x方法2.掌握PH梯度法的原理及操作技術(shù)。3.學(xué)習(xí)用硅膠柱色譜分離精制大黃素4.學(xué)習(xí)輕基恵醜類化合物鑒定方法。(%1)實(shí)驗(yàn)流程圖略（四）實(shí)驗(yàn)步驟1、酸水解用天平稱取大黃粉10g,置500ml燒杯屮，加20%硫酸水溶液100ml,直火加熱lh,用布氏漏斗抽濾，濾餅水洗后于70度左右T?燥。2、總疑基恵醍昔元的提取濾餅經(jīng)干燥后，置索氏提取器中（預(yù)習(xí)索氏提取器的結(jié)構(gòu)原理和使用方法、注意事項(xiàng)），加

4、入乙醸150ml,回流提取2h,得乙醍提取液。乙醞提取液經(jīng)TLC檢杳有大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素、大黃素甲醮和大黃酚。薄層板為硅膠CMC-Na板，展開劑為石汕瞇■乙酸乙酯，展開后在可見光下可看到四個(gè)斑點(diǎn)，Rf=0.9的黃色斑點(diǎn)為大黃酚和大黃素屮醯混合物，在此條件下分不開，其余三個(gè)斑點(diǎn)，按Rf值由大到小分別為大黃素（橙色斑點(diǎn)）、蘆薈大黃素（黃色斑點(diǎn)）、人黃酸（黃色斑點(diǎn)）。3、pH梯度萃取分禺（1）大黃酸的分離與精制將上述乙瞇提取液以5%碳酸氫鈉溶液振蕩萃取，水層呈紫紅色。分岀水層，再重復(fù)萃取數(shù)次，直至不顯紅色為止。

5、合并水層萃取液，用鹽酸酸化至pH3左右，即得黃色沉淀。過濾，先用水洗沉淀數(shù)次，再用少量冰冷的內(nèi)酮洗，以除去有色雜質(zhì)。干燥后以冰醋酸或毗睫結(jié)晶2-3次，得黃色針狀結(jié)晶。經(jīng)TLC與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照鑒定為大黃酸。（2）大黃素的分離與精制碳酸氫鈉溶液提取后的乙醞層再以5%碳酸鈉溶液振蕩萃取數(shù)次，水層呈紅色,合并水層提取液，加鹽酸至酸性，得黃色沉淀，過濾，用水洗沉淀，以冰冷丙酮洗,在冰醋酸或毗呢中結(jié)品數(shù)次，得橙色人針狀結(jié)品。經(jīng)TLC與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照為人黃素。（3）蘆薈大黃素的分離和精制碳酸鈉溶液提取后的乙瞇層，再經(jīng)0.25%氫氧化鈉

6、溶液振蕩萃取數(shù)次，水層呈紅色，合并水層，加鹽酸至酸性，得橙色沉淀。過濾后用水洗沉淀，干燥后在冰醋酸或乙酸乙酯中結(jié)品數(shù)次，得橙色長(zhǎng)針狀結(jié)品。經(jīng)TLC鑒定為蘆薈人黃素。（4）大黃酚和大黃素甲醸的分離與提純上述萃取后的乙憂層用5%氫氧化鈉溶液振蕩萃取數(shù)次，巴至無色。合并深紅色的水層溶液，加鹽酸至酸性，得黃色沉淀。過濾水洗，干燥后得人黃酚和人黃素甲瞇混合物，將此混合物溶于乙酸乙酯屮，用硅膠柱色譜分離，洗脫劑為石油儲(chǔ)-乙酸乙酯（15:1）混合液，先洗脫下的化合物為大黃酚，后洗脫下的化合物為大黃素甲醯，再分別經(jīng)乙酸乙酯結(jié)晶純

7、化，兩者經(jīng)TLC鑒定皆為純品。4、硅膠柱色譜精制大黃素（1）裝柱：取100-200口硅膠約10g,按濕法裝?。?）加樣：將大黃索粗提物溶于5nil石油醸-乙酸乙酯（7:3）混合溶劑中，用吸管吸取樣品溶液于色譜柱床頂端。（3）洗脫：用石油醛-乙酸乙酯（7:3）為洗脫劑洗脫，分段收集，每份10ml,用TLC跟蹤檢杳。請(qǐng)大家先預(yù)習(xí)硅膠柱色譜的濕法和干法裝柱及上樣的相關(guān)注意事項(xiàng)（五）注意事項(xiàng)1、酸水解過程中加熱時(shí)間應(yīng)足夠長(zhǎng)，以保證水解充分。2、同一堿液萃取分為數(shù)次，以保證萃取充分，可用TLC監(jiān)測(cè)。3、乙瞇總提取物要用保鮮

8、膜封嚴(yán)實(shí)，防止乙瞇揮發(fā)。（六）實(shí)驗(yàn)報(bào)告耍求%1記錄大黃蔥釀的提取方法及其原理。%1比較大黃素、大黃酸、大黃素甲醵的酸性及在TLC中的Rf值（附色譜圖）。3、儀器及試劑