聚磷菌的培養(yǎng)

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1、聚磷菌的培養(yǎng)背景：污水中的磷和氮含量過高是造成水體富營(yíng)養(yǎng)化的主要因素。而其中的磷不像氮那樣可以結(jié)合氧轉(zhuǎn)化為氣體，含磷的氣態(tài)物質(zhì)（PH3）又不易轉(zhuǎn)化，所以污水除磷一直都用生物除磷法。即用細(xì)菌等微生物來攝取水中的磷，達(dá)到除磷的效果。而為了提高微生物除磷的效率、便于和其他材料協(xié)同使用，篩選、培養(yǎng)除磷細(xì)菌也是必不可少的工作。培養(yǎng)菌種菌落：聚磷菌（PAOs）菌落來源：廢水除磷工藝中的活性污泥菌落組成：主要由β—2亞群紫色細(xì)菌、不動(dòng)桿菌、紅環(huán)菌屬和綠單胞菌屬組成；其中不動(dòng)桿菌為主導(dǎo)細(xì)菌，除磷作用突出聚磷菌除磷機(jī)理：①好氧條件下，聚磷菌不斷攝取并氧化分解有機(jī)物，產(chǎn)生的能量

2、一部分用于磷的吸收和聚磷的合成，一部分則使ADP與H3PO4結(jié)合，轉(zhuǎn)化為ATP而儲(chǔ)存起來。細(xì)菌以聚磷的形式在細(xì)胞中儲(chǔ)存磷，其量可以超過生長(zhǎng)所需，這一過程稱為聚磷菌磷的攝取。處理過程中，通過從系統(tǒng)中排除高磷污泥以達(dá)到除磷的目的。②在厭氧條件下，聚磷菌體內(nèi)的ATP進(jìn)行水解，放出H3PO4和能量，形成ADP。這一過程稱為聚磷菌磷的釋放。聚磷菌除磷則就是通過以上兩種過程完成的。培養(yǎng)過程：1、材料準(zhǔn)備1.1取樣：從實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行穩(wěn)定的厭氧缺氧SBR反應(yīng)器中，取富含反硝化聚磷菌的活性污泥做為實(shí)驗(yàn)樣品。1.2培養(yǎng)基配方：(1)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（L）：蛋白胨10g；牛肉膏3g

3、；NaCl5g；瓊脂20g；pH7.2，用于反硝化聚磷菌的分離、純化(2)缺磷培養(yǎng)基（L）：CH3COONa2g；Na2HPO4·2H2O23mg；CaCL2·2H2O11mg；NH4C1152.8mg；MgSO4·7H2O81.12mg；K2SO417.83mg；HEPES緩沖液7g；微量元素2mL；pH7.2(3)富磷培養(yǎng)基（L）：CH3COONa2g；K2PO425mg；NH4C1305.52mg；MgSO4·7H2O91.26mg；CaC12·2H2O25.68mg；PIPES緩沖液8.5g；2mL微量元素；pH7.2(4)硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗(yàn)培養(yǎng)基（L

4、）：牛肉膏3g；蛋白胨5g；KNO31g；pH7.4。2~4類培養(yǎng)基用于反硝化聚磷菌的篩選。2、培養(yǎng)基制作2.1牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基A根據(jù)需要計(jì)算每個(gè)培養(yǎng)基所需要的藥品質(zhì)量B按培養(yǎng)基配方、具體計(jì)算量和比例依次準(zhǔn)確地稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入燒杯中。(牛肉膏可用玻棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化后倒入燒杯)C先在上述燒杯中加入少于所需要的水量，用玻棒攪勻，再將稱好的瓊脂放入已溶化的藥品中，然后在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解、溶化。（在瓊脂溶化的過程中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底使燒杯破裂）最后補(bǔ)足所失的水分到所需的總體積。D用精密pH試紙測(cè)量培養(yǎng)基的原始p

5、H值，如果pH偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入1mol/LNaOH，邊加邊攪拌，直至pH達(dá)7．2。反之，則用1mol/LHCl進(jìn)行調(diào)節(jié)。（注意pH值不要調(diào)過頭，以避免回調(diào)）E將或加熱融化后的培養(yǎng)基冷至50℃左右，以無菌手續(xù)傾人滅菌平皿內(nèi)，輕搖平皿底，使培養(yǎng)基平鋪于平皿底部，再次高壓滅菌，之后待其凝固即可。（滅菌后的培養(yǎng)基要放入37℃養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，以檢驗(yàn)滅菌的效果）F檢驗(yàn)合格的培養(yǎng)基編號(hào)待用?？煞旁?℃冰箱內(nèi)保存，但是不宜存放時(shí)間過久2.2缺磷培養(yǎng)基A根據(jù)需要計(jì)算每個(gè)培養(yǎng)基所需要的藥品質(zhì)量B按培養(yǎng)基配方、具體計(jì)算量和比例依次準(zhǔn)確地稱取各類藥品。先在三角燒瓶中

6、加入少量蒸餾水，再加入各種稱量好的藥品C攪拌、適當(dāng)加熱使藥品溶解，并加蒸餾水至所需體積D用精密pH試紙測(cè)量培養(yǎng)基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入1mol/LNaOH，邊加邊攪拌，直至pH達(dá)7．2。反之，則用1mol/LHCl進(jìn)行調(diào)節(jié)。（注意pH值不要調(diào)過頭，以避免回調(diào)）E用濾紙過濾，直至液體培養(yǎng)基清晰便于觀察即可F根據(jù)需要將培養(yǎng)基分裝于各個(gè)三角燒瓶中，高壓滅菌。（滅菌后的培養(yǎng)基要放入37℃養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，以檢驗(yàn)滅菌的效果）G檢驗(yàn)合格的培養(yǎng)基編號(hào)待用。可放在4℃冰箱內(nèi)保存，但是不宜存放時(shí)間過久2.3富磷培養(yǎng)基同“缺磷培養(yǎng)基”2.4硝酸鹽還

7、原產(chǎn)氣試驗(yàn)培養(yǎng)基A根據(jù)需要計(jì)算每個(gè)培養(yǎng)基所需要的藥品質(zhì)量B按培養(yǎng)基配方、具體計(jì)算量和比例依次準(zhǔn)確地稱取牛肉膏、蛋白胨、KNO3放入燒杯中。(牛肉膏可用玻棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化后倒入燒杯)C攪拌、適當(dāng)加熱使藥品溶解，并加蒸餾水至所需體積D用濾紙過濾E根據(jù)需要將培養(yǎng)基分裝于各個(gè)三角燒瓶中，高壓滅菌。（滅菌后的培養(yǎng)基要放入37℃養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，以檢驗(yàn)滅菌的效果）F檢驗(yàn)合格的培養(yǎng)基編號(hào)待用?？煞旁?℃冰箱內(nèi)保存，但是不宜存放時(shí)間過久2、菌株的分離、純化、篩選2.1菌株的分離、純化：A）取10mL污泥至裝有90mL無菌水三角瓶中，加入玻璃珠，將

8、三角瓶放入空氣振蕩器中，把污泥充分搖勻