資源描述：
《高效液相色譜柱》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、高效液相色譜柱簡(jiǎn)介 高效液相色譜柱的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí),經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測(cè)器時(shí),樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。填充劑的要求 最常用的色譜柱填充劑為化學(xué)鍵合硅膠。反相色譜系統(tǒng)使用非極性填充劑，以十八烷基硅烷鍵合硅膠最為常用，辛基硅烷鍵合硅膠和其他類型的硅
2、烷鍵合硅膠（如氰基鍵合硅烷和氨基鍵合硅烷等）也有使用。正相色譜系統(tǒng)使用極性填充劑，常用的填充劑有硅膠等。離子交換色譜系統(tǒng)使用離子交換填充劑；分子排阻色譜系統(tǒng)使用凝膠或高分子多孔微球等填充劑；對(duì)映異構(gòu)體的分離通常使用手性填充劑?！ √畛鋭┑男阅埽ㄈ巛d體的形狀、粒徑、孔徑、表面積、鍵合基團(tuán)的表面覆蓋度、含碳量和鍵合類型等）以及色譜柱的填充，直接影響供試品的保留行為和分離效果?？讖皆?5nm（1nm=10Å）以下的填料適合于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物則應(yīng)選擇孔徑在30nm以上的填料。除另有規(guī)定外，分析柱的填充劑粒徑一般在3μm~10μm之間。
3、粒徑更?。s2μm）的填充劑常用于填裝微徑柱（內(nèi)徑約2mm），使用微徑柱時(shí)，輸液泵的性能、進(jìn)樣體積、檢測(cè)池體積和系統(tǒng)的死體積等必須與之匹配；如有必要，色譜條件也需作適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。當(dāng)對(duì)其測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生爭(zhēng)議時(shí)，應(yīng)以品種正文規(guī)定的色譜條件的測(cè)定結(jié)果為準(zhǔn)。溫度的要求 以硅膠為載體的普通鍵合固定相的使用溫度通常不超過35℃，為改善分離效果可適當(dāng)提高色譜柱的使用溫度，但不能超過60℃。流動(dòng)相的要求 流動(dòng)相的pH值應(yīng)控制在2～8之間。當(dāng)pH值大于8時(shí)，可使載體硅膠溶解；當(dāng)pH值小于2時(shí)，與硅膠相連的化學(xué)鍵合相易水解脫落。當(dāng)色譜系統(tǒng)中需使用pH值大于8的流動(dòng)相時(shí)，應(yīng)選用耐堿的填充劑，如采用高純硅
4、膠為載體并具有高表面覆蓋度的鍵合硅膠填充劑、包覆聚合物填充劑、有機(jī)-無機(jī)雜化填充劑或非硅膠填充劑等；當(dāng)需使用pH值小于2的流動(dòng)相時(shí)，應(yīng)選用耐酸的填充劑，如具有大體積側(cè)鏈能產(chǎn)生空間位阻保護(hù)作用的二異丙基或二異丁基取代十八烷基硅烷鍵合硅膠填充劑，或有機(jī)-無機(jī)雜化填充劑等。色譜柱的柱效和保護(hù)柱 拿到一根新柱時(shí)，一定要先看其使說明，然后測(cè)柱效，定期檢測(cè)柱效，保留在新色譜柱上得到的色譜圖，并記錄條件，定期檢測(cè)儀器的譜帶展寬。若應(yīng)用于在線監(jiān)測(cè)，應(yīng)對(duì)色譜柱提供在線的物理保護(hù)和化學(xué)保護(hù)，例如采取安裝在線過濾器，自裝填料保護(hù)柱和預(yù)裝保護(hù)柱等。在線過濾器的作用是防止顆粒在柱頭累計(jì)，優(yōu)點(diǎn)是基本不影響
5、柱效，在需要高柱效的時(shí)候常用，常更換的消耗品是濾芯和墊圈保護(hù)柱的作用是防止柱子被化學(xué)污染。缺點(diǎn)是多數(shù)保護(hù)柱影響色譜柱的柱效，特別是在用微柱時(shí)，常用的是普通自裝填料的保護(hù)柱。最近新出的一些保護(hù)柱例如Sentry—guard保護(hù)柱，它的特點(diǎn)是高質(zhì)量、高效填料、增加分析柱效、對(duì)臟樣品載荷能力大，能延長(zhǎng)保護(hù)柱的壽命，手可擰緊接頭，安裝時(shí)不需要工具，省時(shí)省，可換芯式設(shè)計(jì)，能采用各種不同的填料，主要適用于非常臟非常復(fù)雜的樣品本底，例如生化樣品，環(huán)境樣品和食品等，或者不想做太多的圃相萃取，不想降低柱效果等情況。色譜柱的清洗 對(duì)所做的樣品要有充分的了解，用對(duì)該樣品洗脫能力最強(qiáng)的流動(dòng)相清洗，對(duì)于
6、硅膠柱，先用甲醇洗去極性雜質(zhì)，然后用干燥的二氯甲烷和正庚烷100—20OraL依次活化，對(duì)于鍵和相柱，一般用甲醇一氯仿一甲醇一水依次沖洗，每種色譜柱有特定的清洗方法，一定要看其使用說明色譜柱的存放 存放前除去雜質(zhì)和鹽，采用合適的存放溶劑，避免色譜柱床的干枯，避免機(jī)械振動(dòng)，防止細(xì)菌生長(zhǎng)，注意存放的溫度。色譜柱的常見故障及排除 1、柱壓過高可能是微粒堵塞，柱床膨脹，不可逆吸附，細(xì)菌生長(zhǎng)等造成的。也 有可能是系統(tǒng)反壓?jiǎn)栴}，例如阻尼器堵塞，進(jìn)樣器堵塞，管路或連接口 堵塞．在線過濾器不干凈，壓力傳感器不準(zhǔn)確等。2、柱效低可能是色譜柱被污染、過濾片部分堵塞、色譜柱內(nèi)的死體積造成，例如
7、流動(dòng)相pH值或者組成不合適造成固定相損失。流動(dòng)相急劇變化，造成固定相物理損壞，機(jī)械振動(dòng)造成固定相產(chǎn)生裂縫，柱床收縮或干枯。也有可能是儀器連接的問題，認(rèn)真檢查進(jìn)樣器、檢測(cè)器、管路、?！ ∽o(hù)柱和在線過濾器等是否連接好，也可能是色譜柱沒有平衡好，進(jìn)樣量過大等問題。 3、重復(fù)性差、不出峰、回收率低可能是色譜柱被污染，流動(dòng)相pH值或者組成不合適造成固定相損失，樣品溶劑不同或樣品本身不穩(wěn)定，固定相極性過強(qiáng)或者流動(dòng)相極性過弱．或者發(fā)生非特異性吸附。也可能梯度實(shí)驗(yàn)時(shí)平衡時(shí)間不足，溫度波動(dòng)，流動(dòng)
