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《無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷探究進(jìn)展》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷探究進(jìn)展【摘要】妊娠孕婦外周血中或?qū)m頸管內(nèi)存在有胎兒細(xì)胞或遺傳物質(zhì)，利于各種方法富集它們并進(jìn)行遺傳分析，檢測胎兒遺傳病及染色體病，可達(dá)到無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷的目的?！娟P(guān)鍵詞】孕婦外周血；富集；胎兒細(xì)胞；無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷產(chǎn)前診斷是預(yù)防單基因疾病、染色體疾病主要的措施。然而目前的產(chǎn)前診斷方法主要利用侵入性方法獲取絨毛細(xì)胞、羊水細(xì)胞、臍帶血細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行疾病檢測，這些有創(chuàng)性手術(shù)存在導(dǎo)致仁5%左右胎兒流產(chǎn)的風(fēng)險。為解決這一難題，人們一直在尋求一種方法能夠從母體中獲取胎兒細(xì)胞或遺傳物質(zhì)進(jìn)行遺產(chǎn)病的檢查，實現(xiàn)無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷。經(jīng)過多年的研究，無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷技術(shù)已經(jīng)得到長足發(fā)展
2、，并逐漸轉(zhuǎn)向臨床應(yīng)用階段，本文將主要闡述無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷技術(shù)的發(fā)展過程，臨床應(yīng)用及未來展望。1母體中胎兒細(xì)胞或遺傳物質(zhì)通過依據(jù)細(xì)胞的特性富集胎兒細(xì)胞或胎兒遺傳物質(zhì)，其中如胎兒的滋養(yǎng)細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、有核紅細(xì)胞、母體血漿中胎兒DNA或RNA等，都可以作為進(jìn)行無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷研究的對象。1.1滋養(yǎng)細(xì)胞：滋養(yǎng)層細(xì)胞主要分布在子宮血管組織和子宮腔內(nèi)，于葉狀絨毛膜轉(zhuǎn)變成平滑絨毛膜過程中脫落和降解到達(dá)孕婦宮頸管，1995年Rodeck等在經(jīng)子宮頸細(xì)胞(transcervicalcellTCC)的灌洗樣本中檢測出滋養(yǎng)層細(xì)胞成分,并且證實通過不同的方法約50%?70%經(jīng)子宮頸可富集到胎兒
3、細(xì)胞［1］。收集TCC細(xì)胞樣本窗口期跨越孕7-13周。但因其多核特點及其與胎盤的嵌合現(xiàn)象，有致誤診可能。1.2淋巴細(xì)胞自從walknownska首先發(fā)現(xiàn)了懷有男胎的孕婦外周血中含有胎兒淋巴細(xì)胞以來，人們通過主要組織相容性抗原分離鑒定胎兒淋巴細(xì)胞進(jìn)行產(chǎn)前診斷［2］。但這類細(xì)胞存在一些不可避免的技術(shù)難題，由于在早孕期還沒產(chǎn)生大量胎兒淋巴細(xì)胞，此時母血中的胎兒淋巴細(xì)胞的數(shù)目極少，因此，不能進(jìn)行早期的產(chǎn)前診斷，限制了其臨床上的應(yīng)用。另外，胎兒淋巴細(xì)胞可長期存在于母體外周血,DianaW在母體外周血中發(fā)現(xiàn)了存在27年的胎兒淋巴細(xì)胞［3］,因此影響了檢測的準(zhǔn)確率，限制了胎兒淋巴
4、細(xì)胞在無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷的應(yīng)用。1.3有核紅細(xì)胞胎兒有核紅細(xì)胞(fetalnucleatedredbloodcells)十分適合于無創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷。在妊娠早期時胎兒有核紅細(xì)胞的含量相對較高，在非妊娠成人中很少出現(xiàn)，其在血液中的生存期約為90天，因此孕婦外周血不會存在上次妊娠時遺留的胎兒有核紅細(xì)胞。此外胎兒有核紅細(xì)胞能夠通過形態(tài)學(xué)進(jìn)行分離。另外胎兒有核紅細(xì)胞表達(dá)的轉(zhuǎn)鐵蛋白（CD71、血型糖蛋白A潛在的胎兒特異性抗原（如HAE9抗原）對于富集和分離胎兒有核紅細(xì)胞都是有用的生化標(biāo)志[4]o1.4母體血漿游離胎兒核酸物質(zhì)1997年Lo等報道了在母體外周血中存在游離的胎兒脫氧核糖
5、核酸（cell-freefetalDNAcffDNA）,cffDNA來源于胎盤，可能由于滋養(yǎng)層細(xì)胞凋亡后其核酸物質(zhì)釋放到母體，孕婦懷孕4周后就能夠被檢測出，其半衰期很短，一旦釋放入外周血7-11小時就被母體清除，這些特征使其很有潛力成為無創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷的胎兒物質(zhì)［5］。然而在母體血中絕大多數(shù)游離DNA來自于母親，游離的胎兒DNA僅占到3%-6%,在對cffDNA分離和鑒定提出了很高的要求，另外，母體血中胎兒mRNA是現(xiàn)在無創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷的又一研究熱點。和游離的胎兒DNA一樣，母體血中胎兒mRNA也主要來源于胎盤組織，胎兒mRNA已被用作研究、監(jiān)測胎盤病理性妊娠的指標(biāo)
6、。有研究表明孕婦血漿中CRHmRNA濃度越高其發(fā)生子癇的風(fēng)險越大［6］。2無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷技術(shù)的應(yīng)用母體外周血中存在的胎兒細(xì)胞或核酸物質(zhì)極其微量，又容易受母體血的干擾。因此對其分離和鑒定的要求也相當(dāng)高，傳統(tǒng)的產(chǎn)前診斷技術(shù)不能用于無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷領(lǐng)域中。2.1胎兒有核紅細(xì)胞富集術(shù)有研究報道1ml母血僅含有—個胎兒有核紅細(xì)胞，通?？刹捎靡韵聨追N方法進(jìn)行富集：(1)利用胎兒有核紅細(xì)胞的密度特征進(jìn)行密度梯度離心；(2課用流式細(xì)胞儀富集表達(dá)CD71的胎兒有核紅細(xì)胞(3)利用胎兒有核紅細(xì)胞的核圓度、核形態(tài)、血紅蛋白丫鏈染色強(qiáng)度和染色胞漿亮度等形態(tài)參數(shù)進(jìn)行分離和富集［7］。用已分離和
7、富集的胎兒細(xì)胞進(jìn)行產(chǎn)前診斷的方法主要有PCR及FISH,可對遺傳病、染色體病進(jìn)行產(chǎn)前診斷。2.2基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)MALDI-TOF-MS能夠高度準(zhǔn)確的測定物質(zhì)的質(zhì)荷比，其分辨率是基因分析儀的100倍［8］。MALDI-TOF-MS與多種技術(shù)結(jié)合能夠特異、靈敏的檢測單個分子水平的DNAo2007年Lo等選擇PLCA4編碼區(qū)域的一個SNP位點，運(yùn)用MALDI?TOF?MS、PCR、和堿基延伸等技術(shù)。根據(jù)染色體雜合子SNP其等位基因含量的比率不同，成功的對懷有21-三體胎兒的孕婦進(jìn)行了無創(chuàng)傷性產(chǎn)前診斷，該法的靈敏度為90%、
