CEA作業(yè)指導(dǎo)書作業(yè)指導(dǎo)書

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1、癌胚抗原檢測作業(yè)指導(dǎo)書1?檢驗(yàn)?zāi)康模篊EA屬癌胚胎性抗原，只在胚胎期產(chǎn)生，主要來源于胎兒的胃、腸道和血液。在正常成人的腸道、胰腺和肝組織中也有少量存在。出生后，CEA的形成被抑制，因此，在正常成人的血液中CEA很難測出?；加薪Y(jié)腸腺癌的病人，CEA含量通常很高。而在20-50%的良性消化系統(tǒng)及肺部疾患屮，CEA含量通常不超過10ng/ml。吸煙者也常見CEA升高。CEA測定主要用于指導(dǎo)結(jié)腸癌治療及隨訪。CEA測定不適用于普通人群的癌癥篩查。因?yàn)镃EA正常不能排除惡性疾病的存在。2?檢驗(yàn)原理:采用雙抗體夾心法原理，整個(gè)過程18分鐘完成。?第1步：30口1標(biāo)本、生物素化抗CEA單克隆

2、抗體和釘（Ru）標(biāo)記的抗CEA單克隆抗體和釘（Ru）標(biāo)記的抗CEA單克隆抗體混勻，形成夾心復(fù)合物。?第2步：加入鏈霉親和素包被的微粒，讓上述形成的復(fù)合物通過生物素與鏈霉親和索間的反應(yīng)結(jié)合到微粒上。?第3步：反應(yīng)混和液吸到測量池屮，微粒通過磁鐵吸附到電極上，未結(jié)合的物質(zhì)被清洗液洗去，電極加電壓后產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過光電倍增管進(jìn)行測定。?檢測結(jié)果由機(jī)器自動(dòng)從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出。此曲線由儀器通過2點(diǎn)定標(biāo)校正，由從試劑條形碼掃描入儀器的原版標(biāo)準(zhǔn)曲線而得。3.性能參數(shù)：3.1線性范圍：線性檢測結(jié)果見CEA方法學(xué)驗(yàn)證記錄。3.2精密度:批內(nèi)n=20,批間n=20o批內(nèi)批間均值ng/mlSDng/

3、mlCV%均值ng/mlSDng/mlCV%0.62310.02173.485.1670.1673.233.3準(zhǔn)確度：檢測結(jié)果見臨檢中心/江蘇省室間質(zhì)評(píng)結(jié)果回報(bào)記錄。3.4可報(bào)告范圍:0.200—50000ng/ml,最大稀釋倍數(shù)為50倍。3.5測量區(qū)間：血清/血漿：0.200—1000ng/mlo高于檢測范圍的標(biāo)木可用通用稀釋液稀釋。。稀釋后的標(biāo)木CEA含量必須高于20ng/mE如用手工稀釋，結(jié)果應(yīng)乘上稀釋倍數(shù)。如果是機(jī)器自動(dòng)稀釋，機(jī)器會(huì)自動(dòng)計(jì)算結(jié)果。3.6靈敏度:0.200ng/ml3.7特異性：無3.樣本要求4?1血清：按標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)方法采集。4.2血漿：肝素、EDTA-K3

4、.枸橡酸鈉或氟化鈉/草酸鉀抗凝均可。4.3標(biāo)本在2—8度可穩(wěn)定2天，-20度可穩(wěn)定6個(gè)月。只能凍融一次。4.4含沉淀的標(biāo)木使用前需離心。4.5標(biāo)本和質(zhì)控品禁用疊氮鈉防腐。5?試劑和設(shè)備：5.1設(shè)備：C0BAS6000組合模塊E601（1）檢查供水系統(tǒng)是否正常。（2）檢查試劑蓋是否松開。（3）接通儀器左側(cè)上方電源按鈕，儀器自檢。（4）登錄：輸入用戶名及密碼，儀器初始化，進(jìn)行自動(dòng)維護(hù)，然后進(jìn)入Standby狀態(tài)。5.2試劑廠商：羅氏診斷產(chǎn)品公司5?3試劑及使用前準(zhǔn)備（1）試劑成分：M：鏈霉親和索包被的微粒（透明瓶蓋），1瓶，6.5mlo粒子濃度0.72mg/ml,生物素結(jié)合能力：4

5、70ng生物素/mg粒子。含防腐劑。R1：生物素化的抗CEA單克隆抗體（灰蓋），1瓶，8mlo濃度7.5mg/l,磷酸緩沖液0.lmol/1,pH6.0o含防腐劑。R2：Ru（bpy）32+標(biāo)記的抗CEA單克隆抗體（黑蓋），1瓶，8mlo濃度4.Omg/1,磷酸緩沖液0.lmol/1,pH6.5o含防腐劑。（2）試劑準(zhǔn)備：檢查各種試劑所需使用的試劑量(3)試劑貯藏要求：存放在2—8度，切莫倒置。未開封，可穩(wěn)定至標(biāo)明的保質(zhì)期。開封后，2-8度12周；放在C0BAS6000上，8周；注意：僅供體外診斷使用；避免皮膚直接接觸液體試劑；廢弄物按生物危害垃圾處理。6.校準(zhǔn)程序：6.1校準(zhǔn)

6、品：羅氏COBAS6000原裝校準(zhǔn)品。要求在有效期內(nèi)使用，過期的校準(zhǔn)液應(yīng)停止使用，保存于2?8°C可穩(wěn)定到有效期。復(fù)溶：用復(fù)溶專用加樣槍準(zhǔn)確吸取lmL去離子水于瓶中，溶解靜置1小時(shí)，混勻并用有蓋小子彈頭分裝200HL/個(gè)，標(biāo)明配制日期，校準(zhǔn)品批號(hào)，配制人以及有效日期，于一20°C凍存?zhèn)溆?。?fù)溶后校準(zhǔn)品成分的穩(wěn)定性：2-8°C儲(chǔ)存。穩(wěn)定性：未打開，2-8°C有效期內(nèi)均可打開后，2-8°C下：12周上機(jī)，20-25°C：只可使用一次(不可反復(fù)凍融)。6.2當(dāng)下列任何一種情況出現(xiàn)時(shí)，請(qǐng)重新校準(zhǔn)：⑴試劑批號(hào)改變⑵根據(jù)質(zhì)控需要進(jìn)行校準(zhǔn)6.3校準(zhǔn)步驟：6.3.1校準(zhǔn)品的準(zhǔn)備：從-20°C冰

7、箱中取出-?個(gè)分裝的校準(zhǔn)品，室溫放置使其完全溶解，并顛倒混勻備用。6.3.2起始定標(biāo)：進(jìn)入Calibration,點(diǎn)擊Status,選擇該項(xiàng)目的定標(biāo)方式(FULL),點(diǎn)擊Save,按在Calibration畫面下的Installation界面設(shè)置好的標(biāo)準(zhǔn)物放置位置裝載好相應(yīng)的定標(biāo)液，再點(diǎn)Start按鍵，儀器開始定標(biāo)；6.3.3重復(fù)定標(biāo)：進(jìn)入Calibration,點(diǎn)擊Status,選擇該項(xiàng)目的定標(biāo)方式(FULL),點(diǎn)擊Save,按在Calibration畫面下的Installation界面設(shè)